[发明专利]一种菠菜蛋白提取物及其应用有效
| 申请号： | 200910227668.9 | 申请日： | 2009-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN101717431A | 公开（公告）日： | 2010-06-02 |
| 发明（设计）人： | 杨军;金光辉;尹启生;宋纪真;罗朝鹏;杨振民;薛超群;金立锋;李锋;王信民;奚家勤 | 申请（专利权）人： | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 |
| 主分类号： | C07K2/00 | 分类号： | C07K2/00;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18;A01N65/08;A01P1/00 |
| 代理公司： | 郑州中民专利代理有限公司 41110 | 代理人： | 姜振东 |
| 地址： | 450001 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 菠菜 蛋白 提取物 及其 应用 | ||
1.一种菠菜蛋白提取物的制备方法，其特征在于：该制备方法的具体步骤 如下：
(1)将粉碎的菠菜叶片，按照重量体积比为1∶2-5的比例与磷酸盐缓冲 液混合，振荡混匀后在2-6℃浸提8-12h，再在4℃条件下离心，弃沉淀，收集 上清液，得到菠菜蛋白粗提液，所述磷酸盐缓冲液浓度为0.05-0.2mol/L， PH6.5-7.5；
(2)向步骤(1)所得的菠菜蛋白粗提液中加入固体硫酸铵，达到40％饱 和度，静置1-3h，然后在4℃条件下离心，弃上清液，得沉淀；
(3)向步骤(2)所得的沉淀用20ml 0.01mol/L PBS缓冲液PH6.2溶解 后装入透析袋中，用上述缓冲液透析12h以上，中间换缓冲液8-10次，尽可能 地除去(NH4)2SO4，即得0-40％饱和度的(NH4)2SO4盐析蛋白组分；
(4)将步骤(3)所得的盐析蛋白组分上样5ml于强阳离子交换层析柱顶 端，流速为1ml/min，所用强阳离子交换层析介质为SP Sepharose HP，上样后 用100ml 0.01mol/L PBS缓冲液PH6.2洗柱，然后用含有0.5mol/L NaCl的 0.01mol/L PBS缓冲液PH6.2阶段洗脱，同时测定其在280nm处的紫外吸光值， 收集具有吸收峰的洗脱组分流出液，装入透析袋中，用水透析12h以上，中间 换水8-10次，将透析过的洗脱组分冰冻后置于冷冻抽干机浓缩，即得菠菜蛋白 提取物。
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