[发明专利]一种菠菜蛋白提取物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于植物病害防治领域，提供一种烟草普通花叶病毒病(Tobaccomosaic virus，TMV)的防治技术方法，具体涉及一种菠菜蛋白提取物的制备及该提取物在烟草病害防治上的应用。 

背景技术

烟草病毒病是一类在烟草上普遍发生且危害严重的侵染性病害，也是世界范围内的重要病害之一，种类很多，前国外报道已从烟草上分离到的病毒有27种，国内已发现17种，其中分布广、危害重的有烟草普通花叶病毒(Tobaccomosaic virus，TMV)、烟草黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)与马铃薯Y病毒(Potato Y virus，PVY)，其次是烟草蚀纹病毒(Tobacco etchvirus，TEV)、烟草环斑病毒(Tobacco ring spot virus，TRSV)等，其他病毒病多为零星发生，各种病毒病在时间及不同的地区间分布略有差异。烟草病毒病既影响烟叶的产量也影响烟叶的质量。发病烟株烟叶质量严重下降，化学成分失调，造成的产量和经济损失严重，已经越来越成为我国烟叶优质高产的一大障碍。 

植物病毒病的防治一直是农业生产上迫切需要解决的难题，目前烟草病毒病的防治主要是采取“预防为主，综合治理”的策略，没有很好的单一防治技术措施，在病害发生后也缺乏有效的治疗方法。该防治策略主要是采取一系列防病措施，以减少病毒传染或切断传染途径和提高烟草本身的抗病性为根本目的。目前主要的防治措施包括选用抗病品种、适宜的栽培措施、施用抗病毒药剂等，但都存在不同类型的缺陷。在应用抗病品种方面，这些抗病品种多具有抗TMV基因，但往往不可避免的出现烟叶不良品质性状与抗病性状的连锁，同时还有不能兼抗多种病毒病的问题；适宜的栽培处理措施对于烟草病毒病的预防是 行之有效的，但存在处理环节过多、人工操作要求繁杂，同时还有处理措施仅局限适用于某一地域；抗病毒药剂(主要是化学药剂)的作用以抑制病毒的活性和诱导烟株产生抗性为主，但存在化学药剂药效不佳、易对烟叶产生药害及带来环境污染等问题；利用转基因技术将外源基因转入植物体内可起到不同程度的抗病效果，但有一定的环境风险，烟草抗病毒基因工程在烟草上的应用尚存在争议，其抗病毒效果亦有待进一步验证。 

寻找安全而又具抗病毒活性的生物源抗病毒活性物质或抗病基因是当前植物病毒病防治领域的研究热点。应用外源性抗病毒蛋白防治植物病毒病效果比较理想。目前发现的这类蛋白大都来源于植物蛋白，如美洲商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral protein，PAP)(Takanami Y.，et al.Plant Mol.Biol.，1992，20(6)：1111-1119)、紫茉莉抗病毒蛋白(Mirabilis antiviralprotein，PAP)(Lodge J K.，et al.Ann.Phytopath.Soc.Japan，1990，56：488-494)等具有较好的抗病毒效果。在食用菌中也发现含有抗植物病毒蛋白，如孙慧等从杨树菇中分离出的抗病毒蛋白对烟草花叶病毒的防效可达83.42％(孙慧等，生物化学与生物物理学报，2001，33(3)：351-354)，付鸣佳等从金针菇中纯化出一种抗烟草花叶病毒蛋白的及其抗病毒活性从金针菇中获得抗烟草花叶病毒蛋白Zb，确定该蛋白抑制中质量浓度为4.4μg/ml(付鸣佳等，福建农林大学学报，2003，32(1)：84-88)。 

我国地域辽阔、植物资源丰富，现有研究发现部分植物中含有多种抗病毒活性物质，如何充分利用丰富的植物资源、筛选获得抗病毒活性物质，进一步研究开发出高效、低毒、高选择性的植物抗病毒制剂具有重要的应用价值和研究意义。菠菜(Spinacia oleracea)为藜科菠菜属一年生或二年生草本，原产亚洲西部的伊朗，有2000年以上的栽培历史，是我国北方地区重要的越冬蔬菜，也是南北各地春、秋、冬季的重要蔬菜之一，在我国广泛种植。目前在植物病害防治尤其是烟叶病害防治发明没有报道。 

发明内容

本发明的目的是针对上述现有技术状况而研制的一种菠菜蛋白提取物及其 应用，将本发明的菠菜蛋白提取物应用于烟草，对烟草花叶病毒的抑制率可达到90％以上，为防治烟草花叶病毒病提供了一种有效的方法，且具有对人类和环境无公害、无污染，具有高效、低毒、无残留的特点。