[发明专利]一种利用核苷酸变化检测辐射处理农产品和畜禽肉的方法

权利要求书

1.一种利用核苷酸变化检测辐照农产品和畜肉的试剂盒，包括：

(1)预涂层载玻片

(2)配制好的低熔点胶：质量分数为0.625％的低熔点胶。

(3)细胞裂解A液：2.5mol/L NaCl、100mM Na₂EDTA、质量分数为0.1％N-月桂肌氨酸钠和10mMTris-HCl

(4)电泳液：1M Tris-HCl pH7.2

(5)染色液：2mg/L溴化乙锭染液、丫啶橙染料(将丫啶橙染料溶于含1％TritionX-100的PBS中，终浓度为6μg/ml，含Rnase100μg/ml)或GELREAD。

2.权利要求1所述的试剂盒，其中预涂层载玻片可以是直接滴一滴琼脂糖溶液后加盖另一块载玻片也可以是浸泡后擦干光面。

3.权利要求1所述的试剂盒，其中电泳液可以是固态也可以是稀释后即可使用的母液。

4.权利要求1至3种任一项所述的试剂盒用于辐射农产品和食品的方法，其中步骤包括：

1)直接剪碎或者酶消化中和后，将制备的悬浮液通过孔径大小200μm的筛布进行过滤，滤液在冰上放置；

2)将100μL细胞悬浮液与约1mL低熔点凝胶溶液(质量分数为0.625％)混合。将载玻片置冰上5分钟，取100μL混合物转移至已预涂层的载玻片上，用解剖刀尖将盖玻片移至一侧，轻轻盖在琼脂糖上。凝胶凝固后将盖玻片揭掉。

3)往细胞裂解A液中添加Triton X-100和DMSO，体积分数分别为0.1％和10％，混匀后将玻片浸入。室温下，浸泡1.5-2小时。

4)将载玻片一个挨一个放在水平电泳槽中，避免留有空间，并使其磨砂面正对阴极。加入新配置电泳缓冲液(1M Tris-HCl pH7.2)至高出载玻片2-4mm(不要让载玻片发生漂移)。室温，2V/cm(电压/电极间距离)电泳20分钟。小心取出载玻片，在水中浸泡5分钟，无水乙醇脱水10分钟。

5)将载玻片浸入溴化乙锭染液(2mg/L)中3-5分钟。浸泡在水中1-2分钟清洗载玻片。在用荧光显微镜观察前，准备好盖玻片盖在载玻片的湿面上，沾掉多余水分。立即观察。

6)荧光显微镜选择510nm-590nm(绿色激发光)的滤波片观察。

7)结果判断：从拍到的照片中核酸碎片电泳后的长度可以对食品辐照情况进行判断。可以根据电泳后的图形分析判断也可以根据测量尾长和尾相进行判断。

5.权利要求4所述的方法，图形分析判断方法为：如果图片中慧星近似于圆形或只有很短的尾巴，则样品没有被辐照过；如果彗星拖尾严重，则样品曾经被辐照；如果图片中只有零星的片断但不是有规则的形状，则样品可能接受过超剂量的辐照。

6.权利要求4所述的方法，测量方法为用图形分析软件测量尾长和尾相，尾长与辐射剂量用线性回归方式进行计算，从而可以判断辐射的剂量。

7.权利要求6所述的方法，经1kGy辐射处理的鸡肉细胞平均尾长和尾相分别为2.17μm和0.76，如果大于上述值则为辐射处理过的，低于上述值则为未辐射处理。

8.权利要求4所述方法，其中农产品可以是黑胡椒、辣椒、白胡椒、大蒜、丁香、桂皮、芥末、小豆蔻、姜、麝香草、罗勒、牛至、水稻、小麦。

9.权利要求4所述方法，其中畜禽肉可以是猪肉、牛肉、羊肉、马肉、驴肉、狗肉、兔肉、鸡肉、鸭肉、鹅肉、鸽肉、鹌鹑肉、火鸡肉或鸵鸟肉。

10.权利要求1至4中任一项所述的试剂盒和检测方法在检测禽畜肉加热终点温度方面的用途。