[发明专利]八角科植物“孩儿莲”的组织培养繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种八角科植物“孩儿莲”的组织培养繁殖方法，具体涉及“孩 儿莲”组织培养过程中的外植体种类选择、初代培养方法、继代培养方法及其 培养基成分。

背景技术

八角科(Illiciaceac)为单属科植物，全世界约50种，我国有28种和2 个变种，主要分布于我国西南部至东部地区；它们为常绿小乔木或灌木，有香 气，喜阴湿环境，多生长于林间溪水边；花两性，腋生或近顶生，红色，花被 片为7～21枚，花期一般在4～6月，具一定的观赏价值。八角科植物主要靠 种子繁殖，其果实大多有毒，如莽草、红茴香和地枫皮等八角科植物的果实都 具有一定毒性，致使此类植物在园林绿化上的应用受到了环境安全因素的限 制。

珍稀观赏植物“孩儿莲”为八角科八角属(Illicium Linn.)植物，常绿小 乔木，树高约3～8m，树冠倒卵形；树皮灰褐色，单叶互生或近轮生，披针形， 叶片革质化程度高，对折易断，枝叶具特殊香味；花形莲花状，花色红润，花 期在4～5月，开花时，花色红润，呈倒挂莲花状，如同微小的灯笼，数朵挂 于枝头，镶嵌于绿叶之间甚是美丽，具有很高的园林观赏价值。尤其是“孩儿 莲”在苏州地区迄今未观察到其正常结果现象，从而可以避免人畜误食果实而 造成中毒的缺陷，可广泛应用于街道、公园的绿化和庭院美化。

据《太湖备考》一书记载：“孩儿莲，木似桂，花如棋子大，色状与莲花 同，花不香，挼其叶嗅之，辛芬似茴。吴中向无此种，顺治间东山翁汉津为云 南河西县令，携归，后为席氏所有，珍为奇品。第花布结子，根无萌芽，欲传 其种不可得，……”。虽然“孩儿莲”传入江浙地区已有300多年的历史，但 其资源极其匮乏，人工栽种的极少，目前，在苏州地区仅存数株成年树，堪称 珍稀树种。这是由于“孩儿莲”不结果实，无法收获种子；嫁接缺少砧木，扦 插繁殖成活率很低，无性繁殖困难，导致一苗难求，这些都限制了“孩儿莲” 在园林绿化上的应用。

近年来，植物组织培养技术在观赏植物上的应用越来越广泛，尤其是在自 然繁育率低的植物上的应用备受人们重视，在木本植物的组培快繁方面也已经 有了一系列的成功报道，但在八角科植物中迄今未获成功，前人对“孩儿莲” 组织培养的关键技术环节也没有进行过系统研究，其组培过程中诸如外植体污 染严重、离体芽生长停止、易褐化枯死等问题没有得到有效解决。

发明内容

本发明的目的是提供一套适用于八角科植物“孩儿莲”组织培养的外植体 种类、灭菌处理方法、初代培养方法、继代培养方法及其培养基成分，解决“孩 儿莲”外植体容易污染、“烂芯”及褐化等难题，为珍稀植物“孩儿莲”的快 速繁殖提供有效的技术支持。

为实现上述发明目的，本发明的技术方案是：一种八角科植物——“孩儿 莲”的组织培养繁殖方法，为离体组织培养，包括如下步骤：

1)以“孩儿莲”当年生枝条顶端的萌动芽为起始材料，经洗涤液浸泡、 流水冲洗工序洗净后，在室内晾干，用作组织培养繁殖的外植体；

2)将上述外植体在浓度为体积比70～75％的乙醇溶液中进行5～6秒钟 的表面处理后，在浓度为重量体积比0.1％的HgCl₂溶液中进行5～6分钟的 杀菌处理，再用无菌水充分清洗5～6次，完成对外植体的消毒灭菌处理；

3)从上述消毒灭菌后的枝条上切取芽片，接种到初代培养基上，在每天 光照12～15小时，光照强度为1500～2000LX、温度为23℃±1℃的条件下培 养，待新叶萌发后转移到继代培养基上继续培养，得到发育正常的组培苗。

所述的初代培养基为White培养基+500mg.L^-1抗褐化剂PVP+6-BA 2.0 mg.L^-1+NAA 0.5mg.L^-1，添加蔗糖和琼脂粉，按重量体积比，蔗糖浓度为初 代培养基的3％，琼脂粉浓度为初代培养基的0.6％；调节pH为5.6～5.8。

所述的继代培养基为White培养基+500mg.L^-1抗褐化剂PVP+6-BA 2.0 mg.L^-1+NAA 0.1mg.L^-1，添加蔗糖和琼脂粉，按重量体积比，蔗糖浓度为初 代培养基的3％，琼脂粉浓度为初代培养基的0.6％；调节pH为5.6～5.8。