[发明专利]一种从骨髓中分离间充质干/祖细胞的方法

权利要求书

1.一种从骨髓细胞分离间充质干/祖细胞的方法，包括如下步骤：

1)将骨髓细胞用间充质干细胞培养体系进行培养，收集第一次贴壁细胞；

2)将间充质干细胞培养体系培养的骨髓未贴壁细胞，用间充质干细胞培养体系 重悬进行二次贴壁培养，去除非贴壁细胞，收集得到第二次贴壁细胞；所述骨髓未贴 壁细胞包括以悬浮和半贴壁形式生长的所有细胞，所述骨髓未贴壁细胞的获取方法是 在步骤1)培养中用吸管反复吹打培养皿3-4次，再用PBS洗培养皿1-2次，从细胞 培养上清以及吸管吹打洗液中通过离心收集所有未贴壁细胞；

两次收集到的贴壁细胞即为间充质干/祖细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)所述骨髓细胞为骨髓单个 核细胞或全骨髓细胞或溶解红细胞后的骨髓细胞。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述培养中的接种浓度为2 ×10⁴-5×10⁴细胞/cm²。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤2)所述未贴壁细胞为原 代骨髓细胞培养过程中的未贴壁细胞。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤1)和步骤2)所述间充 质干细胞培养体系为含有2-10％胎牛血清或1-5％人富血小板血清的α-MEM培养基。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤1)和步骤2)所述培养 的培养条件为35-38℃、5％CO₂，培养时间为2-3天。