[发明专利]检测乙肝五项的荧光微球免疫层析检测卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测领域，具体是涉及定量检测乙肝五项的荧光微球免疫层析检测卡及其制备方法。

背景技术

作为传染性疾病的一种，乙型肝炎已成为大家谈之色变的一种传染病。由于我国医疗诊断条件简陋、饮食习惯不卫生和预防意识薄弱等原因，造成我国现有1.2亿多乙肝病毒携带者，约占人口的10％，每年死于肝癌的人数高达11万。因此，我国的乙肝防治工作任重而道远，而进行乙肝检测是做好乙肝防治工作的一个关键环节。在生物和医学检测中，经常用到免疫分析法，它包括放射免疫分析、酶联免疫分析及免疫层析等方法。放射免疫分析和酶联免疫分析法需要昂贵的设备、专业的操作人员和复杂的操作步骤，难以快速得到检测结果。免疫层析法因操作简单、快速和成本底，而常用于快速定性或半定量检测，如盐酸克伦特罗、黄曲霉毒素和促黄体激素等胶体金试纸条。基于免疫层析技术的产品因操作简便、快速和只需肉眼观察或简单仪器就能显示结果等优点，被广泛用于生物医学和食品安全等快速检测领域。

免疫层析技术出现于80年代初，它通常以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品溶液在层析条上泳动，并同时使样品中的待测物与层析材料上针对待测物的受体(如抗体或抗原)发生高特异、高亲和性的免疫反应。层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域(检测区)，通过酶反应或可目测标记物(如胶体金)或荧光激发而获得测定结果。而游离标记物(即未与待测物结合的标记物)则越过检测区，达到与结合标记物自动分离之目的。免疫层析技术常见的示踪粒子有胶体金、乳胶、胶体硒、明胶等，其中运用最成功的标记物为胶体金。由于胶体金标记利用静电吸附，在液相中稳定性较差，已标记上的蛋白分子容易脱落；不同的材料基质效应明显，背景干扰大；只有当金颗粒达到一定量时，肉眼才能分辨出检测条带与背景差异，因而检测灵敏度不高，在实际检测中只能对检测测物定性或半定量，无法准确定量。目前，通过免疫层析技术来检测乙肝五项或其中几项的公开的专利多采用胶体金或胶体硒等标记技术。如公开号为CN101246171A的专利公开了一种便携式乙肝两对半快速联检装置，此装置可一次通过肉眼观察联检乙肝五项指标，在避免病原物散播、医源性感染、和环保处理废弃物方面存在创新，但却不能进行定量。而以荧光纳米微粒为标记物进行免疫层析检测的相关专利也有报道，如公开号为CN1645146A的专利公开了一种用荧光稀土纳米颗粒作为标记物的免疫层析方法及其检测试纸条的制备，与胶体金相比，它提高了免疫层析检测的灵敏度，还可以进行定量。但此荧光纳米颗粒也存在一定的缺陷，如染料易泄露、抗溶液干扰能力差等，在很大程度上限制了其应用的范围。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种能够灵敏、特异、简便和快速的检测乙肝五项指标的荧光微球免疫层析检测卡，并提供此检测卡的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

提供检测乙肝五项的荧光微球免疫层析检测卡，包括用于检测HBsAg的试纸条A、用于检测HBeAg的试纸条B、用于检测抗-HBs的试纸条C、用于检测抗-HBe的试纸条D和用于检测抗-HBc的试纸条E；

所述试纸条A、试纸条B、试纸条C、试纸条D和试纸条E均包括在底板上依次搭接地粘贴的滤纸、样本垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述的玻璃纤维膜上喷涂有荧光微球垫，所述的硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区；

所述试纸条A的玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记抗-HBs单抗和兔抗，硝酸纤维素膜上检测区喷涂另一种抗-HBs单抗，硝酸纤维素膜上质控区喷涂鼠抗兔IgG或羊抗兔IgG；

所述试纸条B的玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记抗-HBe单抗和兔抗，硝酸纤维素膜上的检测区喷涂另一种抗-HBe单抗，硝酸纤维素膜上质控区喷涂鼠抗兔IgG或羊抗兔IgG；

所述试纸条C的玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记HBsAg和兔抗，硝酸纤维素膜上检测区喷涂HBsAg，硝酸纤维素膜上质控区喷涂鼠抗兔IgG或羊抗兔IgG；

所述试纸条D的玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记HBeAg和兔抗，硝酸纤维素膜上检测区喷涂抗-HBe单抗，硝酸纤维素膜上质控区喷涂鼠抗兔IgG或羊抗兔IgG；

所述试纸条E的玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记HBcAg和兔抗，硝酸纤维素膜上检测区喷涂抗-HBc单抗，硝酸纤维素膜上质控区喷涂鼠抗兔IgG或羊抗兔IgG。