[发明专利]一种延长酸奶储藏期的酸奶发酵剂的制备方法

权利要求书

1.一种延长酸奶储藏期的酸奶发酵剂的制备方法，通过原生质体融合方法制备得到突变菌株作为酸奶发酵剂，其特征在于包括以下步骤：

(a)从新疆酸奶疙瘩中筛选到发酵性能好的乳酸杆菌(LN1)和乳酸球菌(SN1)，将乳酸杆菌(LN1)定义为出发菌株；

(b)将乳酸杆菌(LN1)和乳酸球菌(SN1)分别按3％比例接种于脱脂乳培养基中形成菌液，42℃恒温培养12h，经反复传代直至达到要求的活力；

(c)制备乳酸杆菌(LN1)和乳酸球菌(SN1)的原生质体；

(d)将乳酸杆菌(LN1)和乳酸球菌(SN1)的原生质体进行原生质体融合；

(e)对融合后的原生质体进行筛选，得到具备较强的抗后酸化能力的目的菌株(NO2)、(NO3)。

2.根据权利要求1所述的一种延长酸奶储藏期的方法，其特征在于：步骤(b)所述的要求的活力是指在42℃发酵6小时酸度达到70.00-120°T的情况。

3.根据权利要求1所述的一种延长酸奶储藏期的方法，其特征在于：步骤(c)所述的原生质体制备，首先分别取乳酸杆菌(LN1)和乳酸球菌(SN1)对数生长期菌液10mL，离心并以原生质体稳定液洗涤两次，原生质体稳定液使用体积与菌液体积相同，收集菌体，转入10cm培养皿中；乳酸杆菌(LN1)的原生质体制备条件为：溶菌酶浓度为15.00mg/mL，酶解细胞壁的时间为60min，酶解温度为44℃；乳酸球菌(SN1)的原生质体制备条件为：溶菌酶浓度为3.20mg/mL，酶解细胞壁的时间为60min，酶解温度为44℃。

4.根据权利要求1所述的一种延长酸奶储藏期的方法，其特征在于：步骤(d)所述的原生质体融合具体为：对乳酸杆菌(LN1)和乳酸球菌(SN1)的原生质体分别进行热力灭活，各取4ml灭活的原生质体混合，放置5min后离心，重悬于8ml 35％PEG6000溶液中，37℃水浴保温2min，离心，洗涤2次，重悬于8ml原生质体稳定液中。

5.根据权利要求1所述的一种延长酸奶储藏期的方法，其特征在于：步骤(e)具体为：取步骤(d)中制备得到的原生质体稳定液0.1ml加入到半固体高渗再生培养基中，转入灭菌培养皿中置37℃下培养直到长出菌落；挑取长出的菌落涂布于MRS琼脂培养基上，在37℃下培养12h，选取菌落分布均匀，菌数在100～200之间的平皿，通过影印法接种到MRS琼脂培养基中，分别在20℃和37℃下培养，选取在37℃下生长，而在20℃下不长或生长缓慢的菌落为目的菌。