[发明专利]一株降解有机磷农药的芽孢杆菌及其菌剂的生产方法

权利要求书

1.一株能够高效降解有机磷农药的芽孢杆菌，其特征在于：该菌株是一株蜡样芽孢杆菌 (Bacillus cereus)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号： CGMCC No.3497。

2.权利要求1所述的芽孢杆菌，其特征在于：该菌株的16S rDNA基因序列已经递交到 GenBank数据库，登录号为GU086424。

3.用权利要求1所述芽孢杆菌生产菌剂的方法，其特征在于：发酵培养基以糖蜜为主要 营养物质，生产步骤包括：

(1)培养基配制：

1)菌种保藏培养基：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠5g，琼脂20g，加水至1L， pH 7.0-7.5；

2)菌种活化培养基：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠5g，加水至1L，pH 7.0-7.5；

3)种子培养基：MgSO₄ 1.0g，KH₂PO₄ 5.0g，NaCl 5.0g，K₂HPO₄ 15.0g，蔗糖 100g，蛋白胨50g，加水至10L，pH 7.0-7.5；

4)发酵培养基：MgSO₄ 20g，KH₂PO₄ 100g，NaCl 100g，K₂HPO₄ 300g，糖蜜 12kg，(NH₄)₂SO₄ 0.8kg，加水至200L，pH 7.0-7.5；

以上培养基均在121℃灭菌15-30min；

(2)菌种活化：挑取有机磷农药降解菌CGMCC No.3497至菌种保藏培养基，30℃连续 划线、挑单菌落培养两次后，挑取单菌落接种于菌种活化培养基中，于30℃，150-200 r/min摇床振荡培养12-24h；

(3)液体种子制备：向装有高温灭菌的种子培养基的发酵罐中，按照5％-10％的接种量 接种步骤(2)活化的有机磷农药降解菌，于25-37℃，通空气培养12-24h，得到液 体种子；

(4)液态发酵：向装有高温灭菌的发酵培养基的发酵罐中，按照5％-10％的接种量接种 步骤(3)制备的有机磷农药降解菌液体种子，于25-37℃，通空气培养18-60h，得 到活菌体培养物；

(5)菌剂制备：培养好的发酵液经细菌计数后，超滤浓缩，调节至5×10⁹-2.0×10¹⁰CFU/mL，加入质量分数在0.3％-2％范围内的甘氨酸和质量分数在0.5％-5％范围内 的甘油，灌装保藏；使用时用水稀释300-1000倍。