[发明专利]一种解毒工程菌及其制备方法和应用

权利要求书

1.重组质粒，是在质粒pETDuet-1中的多克隆位点导入解毒酯酶的编码基因和水解酶的编码基因得到的重组质粒。

2.如权利要求1所述的重组质粒，其特征在于：

所述解毒酯酶是如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有解毒酯酶功能的由序列1衍生的蛋白质；

所述水解酶是如下(c)或(d)的蛋白质：

(c)由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(d)将序列3的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有水解酶功能的由序列3衍生的蛋白质。

3.如权利要求2所述的重组质粒，其特征在于：

所述解毒酯酶的编码基因为如下1)或2)或3)或4)的DNA分子：

1)其编码序列是序列表中序列2自5’末端第8至1666位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表中序列2所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)或3)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子；

所述水解酶的编码基因为如下5)或6)或7)或8)的DNA分子：

5)其编码序列是序列表中序列4自5’末端第11至901位核苷酸所示的DNA分子；

6)序列表中序列4所示的DNA分子；

7)在严格条件下与5)或6)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；

8)与5)或6)或7)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子。

4.一种解毒工程菌，是将权利要求1至3中任一所述的重组质粒导入宿主菌得到的解毒工程菌。

5.如权利要求4所述的解毒工程菌，其特征在于：所述宿主菌为大肠杆菌BL21(DE3)；所述解毒工程菌优选为保藏编号为CGMCC No.1785的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)pET30-mpd菌株。

6.一种制备解毒酶液的方法，是用异丙基硫代半乳糖诱导权利要求4或5所述的解毒工程菌进行表达，得到解毒酶液。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述诱导表达的温度为14-25℃，时间为16-22小时。

8.权利要求6或7所述方法制备得到的解毒酶液。

9.权利要求4或5所述工程菌，权利要求8所述解毒酶液在降解农药中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述农药为有机酸酯农药或有机磷农药；所述有机酸酯农药为西维因、高效氯氰菊酯或三氯杀虫酯；所述有机磷农药为马拉硫磷或对硫磷；所述对硫磷为甲基对硫磷。