[发明专利]基因工程改造六-甲基水杨酸合成酶并组合生物合成螺环乙酰乙酸内酯类抗生素

权利要求书

1.一种螺环乙酰乙酸内酯类抗生素，其特征是结构式如下：

式中R₁＝OH，R₂＝H；

或者R₁＝OH，R₂＝Cl。

2.一种通过基因工程改造6-MSAS来组合生物合成螺环乙酰乙酸内酯类抗生素的方 法，其特征是该方法包括：

1)在PCR引物中引入了6-MSAS的KR结构域的催化活性位点的Y突变成F 的突变位点，以含有KR片段的质粒为模板，PCR得到相应的KR片段，通过酶 切连接替代原来的KR结构域，并最终克隆到表达载体pTGV2中，构建成KR 点突变的6-MSAS的表达质粒；

2)将KR结构域定点突变的6-MSAS的表达质粒导入到Streptomyces albus中异 源表达，在得到的重组菌株中产生OSA；

3)将6-MSA KR结构域点突变后产生OSA的表达质粒导入到六-甲基水杨酸合 成酶基因中断的氯丝菌素产生菌Streptomyces antibioticus DSM40725中，得到的 重组菌株发酵，发酵产物经分离纯化得到权利要求1所述的螺环乙酰乙酸内酯类 抗生素；

其中6-MSAS代表六-甲基水杨酸合成酶，OSA代表苔色酸。

3.如权利要求2所述的方法，其特征是所述的重组产生OSAS是通过6-MSAS的KR 结构域催化活性位点1540位的Y突变成F相应的突变位点的序列；其中OSAS代 表苔色酸合成酶。

4.如权利要求2所述的方法，其特征是所述的重组产生OSAS是通过6-MSAS的KR结 构域催化活性位点1540位的Y突变成F相应的突变位点的序列为PCR引物构建成的表 达质粒导入到Streptomyces albus和chlB1基因敲除的Streptomyces antibioticus DSM40725得到的突变菌株。

5.如权利要求1螺环乙酰乙酸内酯类抗生素用于制备抗菌或抗肿瘤药物。