[发明专利]一种检测土壤精氨酸脱胺酶活性的方法

权利要求书

1.一种检测土壤精氨酸脱胺酶活性的方法，其特征在于：

1)分别称取n份5-10g过1-2mm筛的鲜土或预培养土壤样品于150mL三角瓶中，n≥4；向三角瓶中加入2～5mL 10～12mol/L的底物精氨酸溶液，使土壤与底物溶液混合均匀，于三角瓶上塞上不透气的橡皮塞；

将其中n-2个三角瓶于36-38℃培养箱中恒温培养170-190min，作为样品；

余下的2个三角瓶于-19--21℃条件下恒温培养170-190min，作为对照；培养结束后将对照三角瓶在室温条件下解冻；

另取一三角瓶同时作试剂空白对照，即不加土壤，其余同样品处理；

2)分别向上述三角瓶中加入40～60mL 1.5～2mol/L KCI溶液，塞上塞子，振荡55-65min，过滤；

3)分别吸取1～2mL滤液于显色试管中，加入3～5mL 1.5～2mol/L KCI溶液，1～3 mL 0.10～0.15mol/L苯酚钠溶液，0.5～2 mL次氯酸钠碱性溶液和1～3 mL 0.10～0.5mmol/L硝普纳溶液，混合均匀，在室温下显色50-70min，在630nm处以试剂空白对照为比色零点，测定样品和对照的吸光值A；

4)制作工作标准曲线，以铵态氮溶液的标准系列浓度和测定的吸光值A’制作工作标准曲线，得到斜率b；

5)根据吸光值A和斜率b，计算所测三角瓶中溶液的铵态氮浓度S，S＝A*b；

6)根据三角瓶中溶液的铵态氮浓度S，分别计算样品中铵态氮含量S₁及对照中平均铵态氮含量S₂；

7)计算精氨酸脱胺酶活性

计算公式：(S₁-S₂)/W.T，单位mg NH₄⁺-N/g干土·3h

式中：S₁为样品中的NH₄⁺-N含量(mg)，S₂为二个对照中的平均NH₄⁺-N含量(mg)，W为干土重(g)，T土样培养时间(h)。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：吸取10 ml硫酸铵标准储备液置于100 ml容量瓶中，用2mol/L KCI溶液定容，摇匀；然后分别吸取0 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml、15 ml于100 ml容量瓶中，用2mol/L KCI溶液定容，摇匀，得到一系列浓度0 mg/L、2 mg/L、4 mg/L、6 mg/L、8 mg/L、10 mg/L、15 mg/L的标准曲线液；分别吸取1ml标准曲线液于显色试管中，同样品显色和测定吸收度，绘制标准工作曲线。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：显色过程中控制反应体系的pH应为10.5～11.7之间。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：若测定吸光值前，待测液中含有干扰的金属离子，可用EDTA螯合剂掩蔽；

掩蔽剂在显色后加入，即在20-30℃时待测液显色50-70min后即可加入掩蔽剂；如过早加入，会使显色反应很慢，蓝色偏低；加入过晚，则生成的氢氧化物沉淀可能老化而不易溶解。