[发明专利]一种诱导肝卵圆细胞向胆管细胞分化的方法及其专用培养基

权利要求书

1.用于体外诱导肝卵圆细胞分化为胆管细胞的培养基，是在RPMI1640培养基的基础上添加了3％(V/V)胎牛血清，2％(V/V)B27，0.2mol/L L-谷氨酰胺，1％(V/V)青-链霉素。

2.一种体外诱导肝卵圆细胞分化为胆管细胞的方法，包括以下步骤：

1)将表皮形态发生蛋白基因导入进PT67细胞，得到高表达活性表皮形态发生蛋白的PT67细胞；

2)将高表达活性表皮形态发生蛋白的PT67细胞作为饲养层并进行生长阻滞处理后接种WB-F344细胞，用权利要求1所述的体外诱导肝卵圆细胞分化为胆管细胞的专用培养基在37℃、5％CO₂下共培养，得到胆管细胞。

3.根据权利要求2所述的诱导方法，其特征在于：所述步骤1)中的表皮形态发生蛋白具有序列表中序列1的氨基酸残基序列。

4.根据权利要求2或3所述的诱导方法，其特征在于：所述步骤1)中通过含有表皮形态发生蛋白基因的重组真核表达载体或利用慢病毒载体系统或利用脂质体转染法将表皮形态发生蛋白基因导入PT67细胞。

5.根据权利要求2或3所述的诱导方法，其特征在于：所述步骤2)中对高表达活性表皮形态发生蛋白的PT67细胞进行生长阻滞处理的方法为：将贴壁后的高表达活性表皮形态发生蛋白的PT67细胞用浓度为15-20μg/ml的丝裂霉素在37℃、5％CO₂下处理细胞1h。

6.用权利要求2-5任一项所述方法诱导得到的胆管细胞。