[发明专利]一种非洲猪瘟病毒VP73基因的原核表达蛋白及其制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及的是一种基因工程制品的制备方法，具体地说是一种鉴定非洲猪瘟病毒抗体的VP73基因序列原核表达蛋白抗原及其制备方法。

(二)背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触性传染病。其临床症状主要特征包括高热、病程短、高死亡率、内脏器官广泛性出血以及呼吸系统和神经系统功能改变等。由于该病高传染性、高死亡率，给养猪业造成了巨大的经济损失，且野生宿主不可能被根除，因此对该病的防控面临着巨大挑战。

ASF尽管在我国从未发生，但随着国际间交往和进出口贸易的日益频繁，ASF跨边境传播的风险越来越大，如不引起足够重视，一旦发生该病将导致灾难性后果。由于ASF保护性免疫反应的复杂性，目前尚无理想的疫苗用于主动或被动免疫，防治上主要采用严格的诊断和检疫措施，因此建立快速、无感染性的诊断方法对我国十分必要。

(三)发明内容

本发明提供的非洲猪瘟病毒VP73基因的原核表达蛋白及其制备方法目的在于通过大肠杆菌表达系统表达VP73蛋白，为建立ASFV的ELISA检测方法提供检测抗原。提供一种无散毒危险、稳定性好、灵敏度高的原核表达检测抗原及其制备方法。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

非洲猪瘟病毒VP73基因片段含有1188个碱基，编码396个氨基酸残基，在用原核表达载体pET32a进行表达时，VP73基因片段与融合表达载体上的硫氧还蛋白(Trx)得到融合表达，融合蛋白Trx-VP73的分子量约为65KD。

VP73基因片段的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列为：

1    ATGGCATCCGGAGGAGCTTTTTGTTTGATTGCTAACGATGGAAAGGCCGACAAGATTATC

1     M  A  S  G  G  A  F  C  L  I  A  N  D  G  K  A  D  K  I  I

61   TTGGCCCAAGACTTGTTGAACTCTAGAATTTCTAACATTAAAAATGTCAACAAATCCTAT

21    L  A  Q  D  L  L  N  S  R  I  S  N  I  K  N  V  N  K  S  Y

121  GGTAAACCAGACCCAGAACCAACTTTGTCCCAAATCGAAGAAACACATTTGGTTCATTTC

41    G  K  P  D  P  E  P  T  L  S  Q  I  E  E  T  H  L  V  H  F

181  AATGCTCATTTTAAGCCTTATGTTCCAGTTGGATTCGAATACAATAAGGTTAGACCTCAT

61    N  A  H  F  K  P  Y  V  P  V  G  F  E  Y  N  K  V  R  P  H

241  ACCGGTACCCCAACCTTGGGAAACAAATTGACCTTTGGTATTCCACAGTACGGAGACTTT

81    T  G  T  P  T  L  G  N  K  L  T  F  G  I  P  Q  Y  G  D  F

301    TTCCATGATATGGTCGGACACCATATCTTGGGTGCATGTCATTCTTCCTGGCAGGATGCT

101     F  H  D  M  V  G  H  H  I  L  G  A  C  H  S  S  W  Q  D  A

361    CCTATTCAGGGTACCGCCCAGATGGGTGCCCATGGTCAGTTGCAAACCTTTCCTAGAAAC

121     P  I  Q  G  T  A  Q  M  G  A  H  G  Q  L  Q  T  F  P  R  N

421    GGATATGACTGGGACAACCAAACACCTTTGGAGGGTGCCGTTTACACCTTGGTTGATCCA

141     G  Y  D  W  D  N  Q  T  P  L  E  G  A  V  Y  T  L  V  D  P