[发明专利]磁性微粒大量提取DNA的方法

权利要求书

1.磁性微粒从生物样品中大量提取DNA的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

(1)裂解样品：取一定量血液或组织样品，加入蛋白酶K溶液和浓度为3～6M的盐酸胍裂解液，混匀后于56℃水浴中充分裂解5～20min；所述血液样品体积为1～10ml，组织样品为100～1000mg；

(2)形成含磁性微粒-DNA复合物的混合溶液：取0.4～6mg磁性微粒与结合液混合，并加入到裂解后的溶液中，振荡混匀，于室温充分结合，形成含磁性微粒-DNA复合物的混合溶液；

(3)将磁性微粒-DNA复合物从混合溶液中分离：将混合溶液磁性分离，弃去上清，将磁性微粒-DNA复合物从混合溶液中分离出来，收集；

(4)清洗：分别用2～40ml清洗液清洗收集的磁性微粒-DNA复合物，去除蛋白和其他杂质；所述清洗液为75％乙醇；

(5)洗脱：在磁性微粒-DNA复合物中加入0.5～5ml洗脱液，让DNA从磁性微粒上洗脱下来，在外加磁场作用下将磁性微粒和洗脱下来的DNA分离，收集上清，即为纯化的DNA。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)血液样品，蛋白酶K溶液和盐酸胍裂解液的体积比为5∶1∶10；组织样品，蛋白酶K溶液和盐酸胍裂解液的比例为：每100mg组织样品加入200μl蛋白酶K和2ml裂解液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)盐酸胍裂解液的成分是：3～6M GuHCl，0.01～0.02M EDTA，0.01～0.02M NaCl和4～6％TX-100。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)水浴反应温度为56℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(4)清洗液是75％的乙醇。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(5)洗脱液是10mMTris-HCl、1mM EDTA、pH＝8.0的TE溶液或水。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述结合液是聚乙二醇和盐的混合溶液，其中聚乙二醇的体积百分浓度为8％～15％，盐的浓度为1～5M，盐是氯化钠、氯化锂、氯化钡、氯化钾、氯化钙、氯化镁、氯化铯、醋酸钠或醋酸钾。

8.根据权利要求1-7任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)混匀操作前加入与样品的体积比为1∶100～1∶2000的RNase A溶液，RNase A溶液的浓度为10mg/ml。