[发明专利]一种亲和素/链亲和素磁性复合微粒用于细胞分选的方法

权利要求书

1.一种亲和素/链亲和素磁性复合微粒用于细胞分选的方法，该方法包括以下步骤：

(1)亲和素/链亲和素磁性复合微粒的预处理

将亲和素/链亲和素磁性复合微粒分散于平衡盐溶液中，磁性分离，弃上清；

(2)封闭

向步骤(1)产物中加入封闭剂，反应20-120分钟，再用pH＝7.4，0.02M的磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液或醋酸盐缓冲液清洗；

(3)生物素化抗体与细胞的孵育

取待分选的样本细胞，加入生物素抗体，室温反应10-60分钟，再以800rpm-1500rpm的转速离心5～10分钟，弃去上清中未结合的生物素抗体，将样本细胞重悬在偶联缓冲液中；

(4)细胞分选

(4.1)目的细胞和亲和素/链亲和素磁性复合微粒的结合

将步骤(3)得到的结合有生物素抗体的待分选的样本细胞与经步骤(2)封闭处理后的亲和素/链亲和素磁性复合微粒混合，在20℃-35℃下孵育10-60分钟，间隔5-10分钟轻轻晃动反应管，使生物素与亲和素或者链亲和素充分的结合而将要分离的目的细胞固定在亲和素/链亲和素磁性复合微粒的表面；

(4.2)清洗

将步骤(4.1)的反应产物磁性分离，弃上清，加入清洗缓冲液，磁性分离，弃上清，洗去未结合的细胞。

2.根据权利要求1所述亲和素/链亲和素磁性复合微粒用于细胞分选的方法，其特征在于：所述步骤(1)平衡盐溶液是pH＝7.0-7.6，0.02-0.2M的三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液、pH＝7.0-7.6，0.02-0.2M的磷酸缓冲液、N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸盐溶液，或者是加入了0.1-1.0MNaCl的上述溶液。

3.根据权利要求1所述亲和素/链亲和素磁性复合微粒用于细胞分选的方法，其特征在于：所述步骤(2)封闭剂是浓度为1-10％的脱脂奶粉、1-5％的BSA或0.2-2.0％明胶。

4.根据权利要求1所述亲和素/链亲和素磁性复合微粒用于细胞分选的方法，其特征在于：所述步骤(3)偶联缓冲液是：pH＝7.0-9.0，5mM-1M的三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液、pH＝5.0-8，0.02-0.2M的磷酸缓冲液、pH＝9.0-11.0，5mM-1M的碳酸盐缓冲液、pH＝3.6-5.6，5mM-1M的醋酸盐缓冲液、pH＝3.0-7.0，5mM-1M的柠檬酸缓冲液或pH＝7.0-9.0，5mM-1M的TE缓冲液。

5.根据权利要求1所述亲和素/链亲和素磁性复合微粒用于细胞分选的方法，其特征在于：所述步骤(4.2)清洗缓冲液是pH＝7.0-9.0，5Mm-1M的三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液、pH＝5.0-8，0.02-0.2M的磷酸缓冲液、pH＝9.0-11.0，5mM-1M的碳酸盐缓冲液、pH＝3.6-5.6，5mM-1M的醋酸盐缓冲液、pH＝3.0-7.0，5mM-1M的柠檬酸缓冲液或pH＝7.0-9.0，5mM-1M的TE缓冲液或者是含有0.02-0.2％吐温的上述缓冲液。

6.根据权利要求1所述亲和素/链亲和素磁性复合微粒用于细胞分选的方法，其特征在于：所述步骤(1)亲和素/链亲和素磁性复合微粒预处理三次。

7.根据权利要求1所述亲和素/链亲和素磁性复合微粒用于细胞分选的方法，其特征在于：所述样本细胞是外周血，骨髓，脐带血和淋巴组织液中的细胞。