[发明专利]以芦苇地表根须为载体的石油降解菌固定化方法

权利要求书

1.一种以芦苇地表根须为载体的石油降解菌固定化方法，其特征在于 首先筛选出石油降解菌，然后配制石油降解菌悬浊液，最后将石油降解菌 固定化在湿地芦苇地表根须上，其中石油降解菌的固定化方法如下：

(1)根须的预处理：将芦苇的地表根须，先用无菌水浸泡12小时， 再用无水乙醇浸泡5小时后晾干；

(2)固定化：称取0.7g芦苇根须均匀铺于培养皿中；取浓度在2.85 ×10⁶～5.7×10⁶个/mL范围内的石油降解菌悬浊液50mL再加入海藻酸钠 0.1g，混合后均匀地喷洒到芦苇根须上5小时后达到固定化。

2.如权利要求1所述的石油降解菌固定化方法，其特征在于上述石油 降解菌的筛选方法如下：

(1)将石油污染的土壤10g，放入250mL锥形瓶，用100mL生理盐 水充分混匀，待土壤中微生物全部释放到生理盐水后，静置待固液分离； 取其上清液1mL加入液体富集培养基中，在30℃、120r·min^-1的条件下 于振荡培养箱中培养7～10天；待培养液混浊后，再从中移取1mL加入 另一个成分相同的液体富集培养基中，在相同条件下继续培养，重复操作 至少3次以上；

(2)再从中吸取0.2mL菌液均匀涂布于固体筛选培养基平板上，在 30℃恒温培养，直至长出菌落；选择其中比较大的单菌落，划线转接入新 的固体筛选培养基中进行培养，待长出新菌落后，重复划线转接与再培养 操作，直至得到纯化的石油降解菌种，上述的液体富集培养基的成分包括： 柴油1g/L，NaNO₃ 3.0g/L，K₂HPO₄ 0.5g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，KCl 0.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.001g/L，CaCl₂ 0.002g/L，pH 7.0-7.2。

3.如权利要求1所述的石油降解菌固定化方法，其特征在于上述配制 石油降解菌悬浊液的方法如下：

将上述纯化的石油降解菌，用接种环挑取一部分接种于液体富集培养 基中，在120r/min、30℃条件下培养5天，待菌液浑浊后进行涂板计数， 确定配制好的石油降解菌悬浊液浓度为2.85×10⁶～5.7×10⁶个/mL。