[发明专利]以芦苇地表根须为载体的石油降解菌固定化方法

说明书

技术领域

本发明属于强化自然湿地净污功能领域，特别涉及到以芦苇地表根须为载体的石油 降解菌固定化方法。

背景技术

当前我国地表水体一半以上均受到不同程度的污染，严重影响到人们的生产和生活。 净化污染地表水体的方法很多，主要分为物理净化法、化学净化法和生物净化法。其中 物理净化法是采用物理的、机械的方法对污染地表水体进行人工净化，该类方法工艺简 单，但费用高且治标不治本。化学净化法主要是指向污染的水体中投加化学药剂，通过 药剂与污染物质发生化学反应，使水体中的污染物得以去除，该类方法投资大，在时效 和大水域或水体流动性大的地方也有一定的局限性，还易造成二次污染。生物净化法是 利用水生植物对污染物质的吸收和吸附功能以及微生物的降解作用，并采用人工措施来 创造更有利于水生植物和微生物生长和繁殖的环境，培育出大量净化能力强的水生植物 和微生物，以提高对污染水体中有机物氧化降解效率的一种净化方法，该类方法投资省， 净化效果好，同时还能促进水域生态系统的自然恢复，目前使用频率最多是湿地净化。

应用湿地净化污染水体大多采用人工湿地，费时费力。我国自然湿地面积大、分布 广，如合理加以利用既可以净化水体又可以节约人力物力。但由于技术问题，自然湿地 净化污染地表水体的应用还比较少。鉴于自然湿地净污的主要是利用湿地土壤的吸附作 用、湿地植物的吸收作用及其植物根际微生物的降解作用，在自然条件下，湿地的净污 能力十分有限，尤其是针对特殊污染物。而通过延长污水在湿地内的水力停留时间，以 期提高自然湿地的净化效果，又会因过长的停留时间而导致污染物在土壤中累积，从而 影响湿地的生产能力。

发明内容

本发明的目的是提供一种以芦苇地表裸露根须为载体的石油降解菌固定化方法，以 强化自然湿地对石油污染水体的净污能力，克服已有技术的不足。

本发明以石油污染的湿地芦苇地表裸露的根须为载体，从现场湿地采集的石油污染 土壤中进行石油降解菌的分离，并实验室驯化和培养，获得耐盐型石油降解菌，再将其 固定在芦苇根须载体表面，具体方法包括如下步骤：

1、石油降解菌的筛选

(1)将石油污染的土壤10g，放入250mL锥形瓶，用100mL生理盐水充分混匀， 待土壤中微生物全部释放到生理盐水后，静置待固液分离。取其上清液1mL加入液体 富集培养基中，在30℃、120r·min^-1的条件下于振荡培养箱中培养7～10天。待培养 液混浊后，再从中移取1mL液体加入新的液体富集培养基中，培养条件同上，重复同 样操作至少三次以上；从上述的液体富集培养基中吸取0.2mL菌液均匀涂布于固体筛选 培养基平板上，在30℃恒温培养，直至长出菌落；选择其中比较大的单菌落，划线转接 入新的固体筛选培养基中，进行培养。待长出新菌落后，再重复上述操作，直至得到纯 化的石油降解菌种。

2、配制石油降解菌悬浊液

将上述纯化的石油降解菌，用接种环挑取一部分接种于液体富集培养基中，在 120r/min、30℃条件下培养5天，待菌液浑浊后进行涂板计数，确定配制好的石油降解 菌悬浊液浓度为2.85×10⁶～5.7×10⁶个/mL。

上述的液体富集培养基的成分包括：柴油1g/L，NaNO₃ 3.0g/L，K₂HPO₄ 0.5g/L， KH₂PO₄ 0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，KCl 0.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.001g/L，CaCl₂0.002g/L， pH 7.0-7.2。

3、石油降解菌的固定化

(1)根须的预处理：将在湿地采集的芦苇的地表根须，用无菌水浸泡12小时洗净， 再用无水乙醇浸泡5小时后晾干。

(2)固定化：称取0.7g芦苇根须均匀铺于培养皿中；取浓度在2.85×10⁶～5.7×10⁶个/mL范围内的石油降解菌悬浊液50mL再加入海藻酸钠0.1g，混合后均匀地喷洒到芦 苇根须上5小时后达到固定化。