[发明专利]一株羰基还原酶重组菌高效制备(S)-苯基乙二醇的方法

权利要求书

1.一株制备(S)-苯基乙二醇的重组菌，其分类命名为大肠杆菌(Escherichia coli)BL21/pETSCRII，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 209290。

2.权利要求1所述重组菌株CCTCC NO：M 209290的构建方法，其特征 是将羰基还原酶基因scrII插入载体pET28a构建重组质粒pETSCR II，重组质 粒pETSCR II转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞，通过含100μg/mL 卡那霉素的LB平板筛选，获得重组菌株E.coli BL21/pETSCR II，即CCTCC NO：M 209290；步骤为：

①(S)-羰基还原酶基因scrII的获取

用于钓取scr II基因的菌种为近平滑假丝酵母(C.parapsilosis)CCTCC NO： M 203011；

羰基还原酶基因scr II的克隆：以近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis) CCTCC NO：M203011基因组为模板，以含有BamHI酶切位点的

SCR II_F：5’-ATCGGATCCATGGGCGAAATCG AATCTTATTGC-3’，

和含有XhoI酶切位点的

SCR II_R：5’-TGACTCTCGAGTGGACAAGTGTAACCACCATCGAC-3’

为引物，PCR扩增反应获得scrII基因，基因全长840bp；基因scrII的GenBank 编号为：GQ411433；

PCR体系为：ddH₂O 35.5μL，10×Reaction Buffer 5μL，25mmol/L Mg²⁺3μL， 2.5mmol/L dNTP 4μL，Taq DNA Polymerase 0.5μL，25pmol/μL的引物SCRII _F和SCRII_R各1μL；

PCR反应条件：94℃ 4min；94℃ 1min、56℃ 1min、72℃ 1min，30个 循环；72℃ 10min；

②重组质粒pETSCR II的构建：

利用限制性内切酶BamHI和XhoI对目的基因scrII和表达载体pET28a分 别进行双酶切，处理后的DNA片断通过粘性末端连接，获得带有羰基还原酶基 因scrII的重组质粒pETSCRII；

③重组质粒转化大肠杆菌：取重组质粒pETSCR II 2μL，转化大肠杆菌 E.coli BL21(DE3)感受态细胞，转化液涂布到含有100μg/mL卡那霉素的LB 平板上，37℃倒置培养过夜，获得阳性克隆E.coli BL21/pETSCRII。