[发明专利]猪副嗜血杆菌血清4型、5型、13型三价油乳剂灭活疫苗

权利要求书

1.猪副嗜血杆菌血清4型、5型、13型三价油乳剂灭活疫苗，其特征是由我国当前猪副嗜血杆菌主要流行血清型4、5、13型的分离株经灭活后按比例混合制成三价油乳剂灭活疫苗。所含佐剂的成份有矿物油、表面活性剂。

2.根据权利要求1所述的三价油乳剂灭活疫苗所用的分离株为猪副嗜血杆菌血清4、5、13型，菌株编号为SWUN0662、SWUN0661、SWUN0642，均分离自广东。

3.根据权利要求1所述的三价油乳剂灭活疫苗，其中所述抗原的制备方法为，将猪副嗜血杆菌血清4、5、13型分离株接种于1％的0.02％NAD溶液及5％新生小牛血清的TSB肉汤，37℃、180r/min振荡培养24h，加入终浓度为0.3％的甲醛灭活11-13h，最后将三种菌株的培养物浓度均浓缩至1×10¹⁰CFU/ml。

4.根据权利要求1所述的三价油乳剂灭活疫苗，其中所述矿物油为马可52轻质石蜡油。

5.根据权利要求1所述的三价油乳剂灭活疫苗，其中所述表面活性剂为司本-80、吐温-80、硬脂酸铝。

6.根据权利要求1所述的三价油乳剂灭活疫苗，其中所述的油乳剂灭活苗的制备方法，该方法包括以下步骤：

1)细菌的培养：将猪副嗜血杆菌血清4型、5型和13型三株种子菌分别接种于TSA固体培养基，37℃恒温箱中培养，24h后挑取单个菌落，接入含NAD及小牛血清的TSB液体培养基中，37℃、180r/min条件下振荡培养12-16h后再将此菌液按1％的比例加入新配制的TSB液体培养基中进行大量增殖。37℃、180r/min振荡培养24h后，收集菌液，用分光光度计测定细菌浓度。

2)细菌的灭活：按TSB液体培养基总体积0.3％缓慢加入甲醛，于37℃振荡灭活11-13h。

3)油乳剂水相的制备：三个血清型的菌种灭活后，将各个血清型的菌液浓度均调至1×10¹⁰CFU/ml，然后将调整浓度后的菌液按1∶1∶1的体积比混合，按总体积的4％缓慢加入灭菌吐温-80并搅拌均匀。

4)油相制备：取马可52轻质石蜡油93份，加入硬脂酸铝1份，边加边搅拌，直到透明为止，再加入6份司本-80，充分混匀，121℃高压蒸汽灭菌30min，冷却至室温备用。

5)油乳剂灭活苗的制备：将制备好的油相和水相等体积混合，于均质机中乳化。