[发明专利]一种增强原花青素生物活性的分子修饰方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种对天然植物多酚进行分子修饰的方法：以落叶松或其它松属树皮提 取分离的原花青素为原料，通过对其分子中的羟基没食子酰化，合成没食子酰化原花青 素，从而实现增强原花青素抗氧化及清除自由基生物活性。

背景技术

原花色素(proanthocyanidins)是植物体内生成的一大类天然多酚，原花青素 (procyanidins)是其中分布最广、数量最多的一种。1951年法国Jacques Masquelier首 次发现原花青素具有抗氧化性能，并成功地从海岸松树皮中提取得原花青素。1967年美 国Joslyn等、1976年Bombardelli等又相继发现了从葡萄籽、皮中提取分离原花青素的 方法，扩展了原花青素的资源。从上世纪80年代以来，国外对于原花青素的资源开发、 提取分离方法、结构鉴定及其生物活性、药用功能等进行了大量研究，已有多种产品问 世，例如：从海岸松和其它松属树皮中提取的原花青素(商品名Pycnogenol，中文名为 碧萝芷)，从葡萄籽、皮提取的原花青素(商品名Grapenol)等。

众多研究已阐明，原花色素植物多酚具有抗氧化活性是基于多酚具有还原性，酚羟 基作为H供体有捕获、钝化自由基的功能，以及多酚羟基能络合对自由基反应起催化作 用的金属离子(铁，铜等)、从而抑制自由基链式反应的扩展。人们早已知悉食用油脂和 富脂食品的氧化变质是由氧自由基引发。此外，现代医学方法证明，人体新陈代谢产生 的自由基副产物以及通过外界辐射等途径引发自由基可对人体脂质、蛋白质、核酸、生 物膜等生物大分子造成损伤，从而引发多种疾病，如心脑血管病、癌变、衰老、炎症等。 为此，国内外倍加重视原花青素作为一类具有抗氧化清除自由基作用的天然药物和保健 品的开发研究。

我国从上世纪80年代起已加入世界研究原花色素的行列，但总体上仍处于植物化学 研究阶段。近十几年来，国内在原花青素的提取和纯化工艺及其功能研究有很大进展， 已有厂家生产葡萄籽、皮和马尾松树皮的提取物，作为天然抗氧化剂进入市场。

纵观国内外迄今关于原花青素的研究报道，以往研究只着眼于其本身固有的功能效 应，如作为一种抗氧化及自由基清除剂，在保健品、医药、食品、化妆品中得到多方面 应用。但是，对通过分子结构修饰以增强生物活性的研究并未予以关注。

发明内容

为了解决现有技术主要集中在提取分离及药用研究上，本发明提供一种增强原花青 素生物活性的分子修饰方法，通过酰化反应在原花青素分子中羟基的位置上引入一种多 酚羧酸——没食子酸(3，4，5-三羟基苯甲酸)，合成没食子酰化原花青素，从而使其抗 氧化、清除自由基活性得到增强。

本发明的方案为：一种增强原花青素生物活性的分子修饰方法，步骤为：

第一步，合成三乙酰基没食子酰化原花青素：按原花青素与3，4，5-三乙酰基没食子 酰氯物质的量比为1∶5～1∶7(mol∶mol)，将原花青素与3，4，5-三乙酰基没食子酰氯在 溶剂中催化剂存在下于50～100℃下进行酰化反应，反应结束后减压蒸馏去除溶剂和过量 催化剂，然后用乙酸乙酯萃取，萃取液减压去除乙酸乙酯，干燥，得到中间产物三乙酰 基没食子酰化原花青素；所述的原花青素为从落叶松或其它松属树皮提取分离得到的原 花青素。所述的催化剂为吡啶，用量为三乙酰基没食子酰氯的物质的量(mol)的1.0～ 1.5倍，吡啶属弱碱性有利于防止没食子酰基酯键被破坏。所述的溶剂为1，4-二氧六环， 1，4-二氧六环对原花青素和酰氯的溶解性好，可以实现均相反应；而且沸点也比较合适。

第二步，脱除乙酰保护基：向第一步反应得到的三乙酰基没食子酰化原花青素丙酮 溶液中加碱溶液，控制溶液pH值在7.5～8.5，在0～5℃下脱除乙酰基，然后，调节溶液 pH值在2～4；所述的碱溶液为0.05～0.1mol/L的NaOH或KOH。所述的酸可以使用0.1 mol/L的HCl或硫酸、硝酸等酸来调节pH。

第三步，纯化处理：将第二步脱除乙酰保护基后的溶液，蒸除丙酮得固体产物，将 固体产物溶于乙酸乙酯、水洗，蒸除乙酸乙酯即得到目标产物没食子酰化原花青素。

本发明方法的可行性依据是：