[发明专利]从马比木中提取喜树碱和9-甲氧基喜树碱的方法

权利要求书

1.一种从马比木中提取喜树碱的方法，其步骤包括：

(1)预处理及发酵步骤：将马比木材料破碎，按原料酶液比为1∶1~2(w/w)投入发酵罐或发酵池，在温度为20～50℃，发酵1～5天，所述的酶为安琪高糖干酵母或发利干酵母，其在水溶液中的量为1~10‰(w/w)；

(2)溶剂提取步骤：将上述步骤(1)中得到的发酵混合物投入提取罐，使用冷渗法、温浸法或回流法中的一种方法提取1-12小时，每次溶剂的加入量为初始原料的6~10倍(w/v)，溶剂提取1～3次，过滤，合并提取液；所述的溶剂为下述溶剂中的一种：A.甲醇与水的混合物，混合物中甲醇的含量占0-100wt％；B.乙醇与水的混合物，混合物中乙醇的含量占0-100wt％；

(3)浓缩步骤：将步骤(2)中得到的提取液加入抗氧化剂，浓缩，得浓缩浸膏，所述的抗氧化剂为二氧化硫和硫酸亚铁中的一种或两种，用量为提取液的0.5～10‰(w/v)：

(4)萃取步骤：将提取物浓缩液用酸调pH值至1～6，然后加入1~3倍量有机溶剂(v/v)，萃取，静置，收集有机相，萃余项重复萃取2～3次，合并有机相，浓缩，回收溶剂，得粗提物浸膏，所述的酸为醋酸、甲酸、硫酸、盐酸或柠檬酸中的一种或几种；萃取所用的有机溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷或氯仿；

(5)分离步骤：

(a)将粗提物浸膏中加入10-100％丙酮水溶液，搅拌均匀，静置12～24小时，抽滤，滤饼为含喜树碱的粗品；

(b)将上述(a)中喜树碱的粗品加入脂肪醇或脂肪醇与丙酮、乙酸乙酯、 氯代甲烷中一种混合物，混合物中脂肪醇与丙酮、乙酸乙酯、氯代甲烷中的一种溶剂比例为(5-95％，v/v)，搅拌，静置，抽滤，滤饼为含喜树碱的粗品；

(c)将上述(b)得到的滤饼使用不同pH的水溶液溶解，过滤，结晶，使用甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯代甲烷、二甲基甲酰胺中混合溶剂进行重结晶；

(d)实施上述(c)操作步骤2-3次，即可得到高于98％的喜树碱产品，干燥，粉碎，装袋，入库。

2.根据权利要求1所述的一种从马比木中提取喜树碱的方法，其特征在于：提取步骤所述的溶剂为下述溶剂中的一种：A.甲醇与水的混合物，混合物中甲醇的含量占30-100wt％；B.乙醇与水的混合物，混合物中乙醇的含量占30-100wt％。

3.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵与溶剂提取结合技术从马比木中提取分离高纯度喜树碱和9-甲氧基喜树碱的方法，其特征在于：浓缩步骤所述的抗氧化剂为二氧化硫和硫酸亚铁中的一种，用量为提取液的1～5‰(w/v)。

4.根据权利要求1所述的一种从马比木中提取喜树碱的方法，其特征在于：萃取步骤所用的酸为醋酸、硫酸、盐酸或柠檬酸中的一种或几种；萃取所用的有机溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷或氯仿。

5.根据权利要求1所述的一种从马比木中提取喜树碱的方法，其特征在于：分离步骤(e)所述的柱层析填料为大孔树脂、活性炭、硅藻土、硅胶、氧化铝中的一种，洗脱剂可以为脂肪醇与水的混合物其中脂肪醇在水中的含量为30-100wt％；或使用脂肪醇、丙酮、乙酸乙酯、氯代甲烷中的一种或几种进行洗脱。