[发明专利]一种结核分枝杆菌的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种结核分枝杆菌的试剂盒，其特征是该试剂盒包括：酶标板，生物素标记核酸适配子，辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素及其显色底物；

所述的生物素标记核酸适配子NK2：将NK2序列合成，生物素标记NK2的5’端为：bio-NK2，并用无菌双蒸水稀释为400nM的浓度，-20℃保存。

2.一种结核分枝杆菌的试剂盒检测结核分枝杆菌的方法，其步骤是：

A、将待检样品，痰液或血液或体液或细菌1000CFU/mL/痰液加在96孔酶标板，100μl/孔，4度孵育过夜；

B、含有5/10000吐温-20的PBS，PBS溶液：NaCl 8g，KCl 0.2g，Na₂HPO₄1.44g，KH₂PO₄ 0.24g，加去离子水溶解，定容至1000ml，调pH至7.4，15磅灭菌20min，置4℃保存，洗涤六遍；

C、1％g/ml牛血清白蛋白PBS溶解，封闭96孔板，100μl/孔，37度封闭1小时；

D、用含有5/10000吐温-20的PBS，洗涤六遍；

E、加入bio-NK2，400nM/孔，PBS稀释，37度孵育1小时；

F、含有5/10000吐温-20的PBS，洗涤六遍；

G、加入加辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素1∶1000，PBS稀释，100μl/孔，37度孵育1小时；

H、含有5/10000吐温-20的PBS，洗涤六遍；

J、加入底物显色剂，显色2分钟，用2M浓硫酸中止显色；

K、1小时内在多功能酶标仪450nM下检测吸光度；

所述的底物显色剂配方包括：A底物是：TMB 20mg，先用无水乙醇10ml溶解，充分振荡，加双蒸水定容到100ml；B底物是：取1水柠檬酸2.1g，无水Na2HPO4 2.82g，0.75％的过氧化氢0.64ml，双蒸水定容至100ml，A底物与B底物各取5ml混匀。

3.权利要求1所述的一种结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于：所述的生物素标记核酸适配子NK2，其序列为SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。