[发明专利]一种蛋白质分子印迹薄膜的制备方法

权利要求书

1.一种蛋白质分子印迹薄膜的制备方法，其步骤是：

(1)、制备蛋白质分子印迹膜的载体玻璃片的预处理：

将盖玻片放入烧杯，加入1～5克的清洗剂于300～500mL去离子水中，超声 5～20min；将盖玻片取出放入另一烧杯，经去离子水3～5次冲洗后，在1mol/L 氢氧化钠溶液中浸泡并超声5～20min；取出盖玻片，用去离子水冲洗以除去残留 在玻片上的氢氧化钠溶液，经3～5次冲洗后，加入去离子水超声5～20min；将离 子水倒出，加入1mol/L HCl溶液浸泡，超声5～20min；取出盖玻片，用去离子 水冲洗以除去残留在盖玻片上的HCl溶液，经3～5次冲洗后，加入去离子水超 声5～20min；最后将上述盖玻片取出，晾干，备用；

(2)、模板蛋白、功能单体和交联单体溶液的配制：

用磷酸盐缓冲液配制浓度10^-6～10^-8M的牛血红蛋白溶液，称取与模板蛋白的 摩尔数比达到400∶1水溶性功能单体加到1mL蛋白溶液中，混匀，于冰箱中4℃ 放置过夜，再加入N，N′-亚甲基双丙烯酰胺，超声脱气5～10min，通氮气5～10min 后，依次加入引发剂5～10μL，与功能单体的摩尔比在500～1000之间和催化剂 1μL，混匀；

所述的水溶性功能单体为丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、丙烯酸或甲基丙烯酸；

(3)、在两块玻片间进行聚合反应：

将步骤(2)中的蛋白质模板分子、功能单体、交联单体和引发剂混匀后，用 移液器吸取30～50μL缓缓滴加在载玻片上，盖上盖玻片，使液滴全被盖住，聚 合2-3小时，成膜后揭开盖玻片，得到与盖玻片面积一样的聚合物膜；

(4)、洗脱模板蛋白分子：

将分子印迹膜放入烧杯中，每次吸取2mL洗脱液加入其中，摇动3-4小时后 测其紫外-可见吸光值，直到检测不到吸收峰为止，最后用去离子水冲洗掉残留 在膜上的洗脱剂，通过测洗脱液中蛋白的含量，来判断洗脱液的洗脱效率；

(5)、按(1)、(2)、(3)、(4)步骤制备非印迹膜，在制备聚合物膜的过程 中不加入模板蛋白分子；

(6)、分子印迹膜对目标蛋白的吸附量的计算方法：

将经过洗脱过程的分子印迹膜MIPM和非分子印迹膜NIPM分别放入加有重 结合模板蛋白溶液的6孔板中，每隔15～60min利用紫外/可见分光光度计测量 6孔板中重结合模板蛋白溶液的吸光度值，根据吸附量公式计算分子印迹膜和非 分子印迹膜对蛋白的吸附量，吸附量：Q_吸＝(C_O-C_余)×V/S，其中Q_吸为MIPM 和NIPM吸附模板蛋白的吸附量；C_O为重结合模板蛋白溶液的浓度；C_余为结合 2小时后6孔板中重结合模板蛋白溶液的浓度；

(7)、分子印迹膜的选择性吸附评价方法：

将MIPM和NIPM分别放入分别盛有不同种类蛋白溶液：鸡蛋清溶菌酶， 牛血清蛋白，肌红蛋白，牛血红蛋白的6孔板中，静置放置4小时后，利用紫外 /可见分光光度计测量6孔板中不同种类重结合蛋白溶液的浓度，计算吸附量， 通过印迹因子α的值来评价印迹膜对模板蛋白的识别性能，α值＝Q_MIPM吸/Q_NIPM吸， 式中：Q_MIPM吸为印迹膜对某种蛋白质溶液的吸附容量；Q_NIPM吸为非印迹膜对某 种蛋白质溶液的吸附容量。

2.根据权利要求1所述的一种蛋白质分子印迹薄膜的制备方法，其特征在 于：所述的印迹膜的载体是普通玻璃、石英玻璃或云母。

3.根据权利要求1所述的一种蛋白质分子印迹薄膜的制备方法，其特征在 于：所述的模板蛋白是水溶性并与功能单体、交联单体相容的蛋白，选自血红蛋 白、肌红蛋白、牛血清白蛋白中的任意一种。