[发明专利]NOS1AP基因内含子2区域上rs12742393多态位点及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分子生物技术领域的多态位点及其检测方法，具体是一种NOS1AP(一氧化氮合酶1衔接蛋白)基因内含子2区域上rs12742393多态位点及其检测方法。

背景技术

NOS1AP基因位于染色体1q23.3，该基因编码的蛋白属于一种衔接蛋白，可以调节神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的活性，并影响N甲基D天冬氨酸受体(NMDAR)介导的一氧化氮的释放。近期研究表明，nNOS功能紊乱不仅参与糖尿病自主神经病变、糖尿病肾病及视网膜病变，而且直接参与胰岛素分泌和胰岛素释放。NOS1AP在胰岛细胞中高表达，可能通过对nNOS的调节作用参与胰岛素分泌的调节。NOS1AP基因上的多态位点，如rs12742393的研究有望成为糖尿病遗传学研究的新热点。为适应国际上糖尿病遗传学研究的趋势，目前迫切需要建立在大规模样本中检测NOS1AP基因上多态位点的稳定方法。目前对rs12742393位点在白种人和中国人群中鲜有研究，国内外尚未有对该位点进行大批量检测的相关报道。

经对现有技术的文献检索发现，Sequenom公司在2005年针对MassARRAY iPlex技术公开发行了一份应用指南《iPLEX Application Guide》，该指南提及，MassARRAY iPlex方法是一种新型的用于高通量SNP检测方法，该方法利用单碱基延伸和基质辅助激光解吸飞行质谱测定SNP位点基因型，该指南描述了此技术的操作方法，包括如下步骤：基因组DNA模板的提取；设计特异性核酸引物扩增目的基因；测定SNP位点基因型等步骤。但是该方法对于SNP位点引物的设计只描述了设计原则，并且无论是DNA的提取方法，还是引物设计的实际操作都使得该方法在应用到具体基因时存在一定局限性。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种NOS1AP基因内含子2区域上rs12742393多态位点及其检测方法。本发明提供了一种NOS1AP基因内含子2区域上rs12742393多态位点，并且建立了一种在大批量样本中进行NOS1AP基因上rs12742393多态位点快速检测的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的，

本发明涉及一种分离核酸，其序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明涉及的一种NOS1AP基因内含子2区域上rs12742393多态位点的检测方法，步骤包括：

步骤一，从样品中提取基因组DNA；

步骤二，设计可特异性扩增出含SEQ ID NO：1所示序列中第121位核苷酸位点的核酸引物；

步骤三，以步骤一得到的基因组DNA为模板，利用引物进行扩增，得到扩增DNA片段；

步骤四，检测步骤三扩增得到的DNA片段中含有的如SEQID NO：1所示序列第121位核苷酸位点是否存在A到C的单核苷酸多态性。

步骤二中，所述核酸引物长度为22bp～30bp。

步骤二中，所述核酸引物具体为：

正向引物：5’-ACG TTG GAT GAG GAT AAC ACC ACC CAT ACC-3’，

反向引物：5’-ACG TTG GAT GCA CTA TAA GCT GGG AAC AGG-3’。

步骤四中，所述测定为，用单碱基延伸和利用基质辅助激光解吸飞行质谱进行测定。

本发明从样品中提取基因组DNA，以此作为DNA模板；根据NOS1AP基因rs12742393多态位点设计一对特异性核酸引物，扩增目的基因；测定rs12742393多态位点基因型，检测SEQ IDNO：1所示序列第121位是否存在A到C的单核苷酸多态性。

本发明具有如下的有益效果：本发明提供了一种NOS1AP基因内含子2区域上rs12742393多态位点；建立了一种在大批量样本中进行NOS1AP基因rs12742393多态位点快速检测的方法，可利用一台MassARRAY iPLEX设备，8小时内完成768个样本的rs12742393多态位点检测。

附图说明

图1为NOS1AP基因结构及rs12742393多态位点示意图；

图2为基质辅助激光解吸飞行质谱检测rs12742393多态位点的结果示意图。

具体实施方式