[发明专利]鸡眼睛药材中鞣花酸类成分的含量测定方法

权利要求书

1.鸡眼睛药材中鞣花酸类成分的含量测定方法，其特征在于：采用高效液相色谱法或超高效液相色谱法，在同一色谱条件下对鸡眼睛药材中所含的鞣花酸、3,3′-二甲氧基鞣花酸、3,3′-二甲氧基鞣花酸-4′-O-β-D-木糖苷、3,3′-二甲氧基鞣花酸-4′-O-β-D-葡萄糖苷、3,3′-二甲氧基鞣花酸-4′-O-α-D-阿拉伯糖苷五个成分中的至少两个成分同时进行含量测定；测定方法是以鞣花酸、3,3′-二甲氧基鞣花酸、3,3′-二甲氧基鞣花酸-4′-O-β-D-木糖苷、3,3′-二甲氧基鞣花酸-4′-O-β-D-葡萄糖苷、3,3′-二甲氧基鞣花酸-4′-O-α-D-阿拉伯糖苷五种对照品中的至少两种为对照，以乙腈∶H₃PO₄水溶液=6～100∶94～0为流动相梯度洗脱的高效液相色谱法或超高效液相色谱法；该方法包括以下步骤：

（1）色谱条件与系统适用性试验：

仪器：Waters ACQUITY UPLC色谱仪；

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱；

流动相：A为乙腈，B为0.1%～1%H₃PO₄水溶液，按A∶B=6～100∶94～0进行梯度洗脱；

流速：0.2mL/min；

柱温：20℃～50℃；

检测波长：235～260nm；

进样量：1μL；

理论塔板数计算均在160000以上；

（2）对照品溶液的制备：分别称取鞣花酸、3,3′-二甲氧基鞣花酸、3,3′-二甲氧基鞣花酸-4′-O-β-D-木糖苷、3,3′-二甲氧基鞣花酸-4′-O-β-D-葡萄糖苷、3,3′-二甲氧基鞣花酸-4′-O-α-D-阿拉伯糖苷对照品中的至少两种，加甲醇溶解后置同一容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得对照品溶液；

（3）供试品溶液的制备：取鸡眼睛药材粉末适量，精密称定，加甲醇适量，提取2～8h，浓缩后用甲醇稀释，得供试品溶液； 

（4）测定方法：按照步骤（1）所述色谱条件测定，即得。

2.按照权利要求1所述鸡眼睛药材中鞣花酸类成分的含量测定方法，其特征在于：流动相梯度洗脱过程中，洗脱液的A、B相变化为：开始时，A相6%，B相94%，稳定1min；第19min时，A相35%，B相65%；第22min时，A相100%，B相为0。

3.按照权利要求1所述鸡眼睛药材中鞣花酸类成分的含量测定方法，其特征在于：步骤（2）对照品溶液的制备为：分别称取鞣花酸、3,3′-二甲氧基鞣花酸、3,3′-二甲氧基鞣花酸-4′-O-β-D-木糖苷、3,3′-二甲氧基鞣花酸-4′-O-β-D-葡萄糖苷、3,3′-二甲氧基鞣花酸-4′-O-α-D -阿拉伯糖苷对照品中的至少两种，加甲醇溶解，得对照品储备液；分别精密量取上述对照品储备液，置同一容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制得浓度≤0.1mg/ml的溶液，即得对照品溶液。

4.按照权利要求1所述鸡眼睛药材中鞣花酸类成分的含量测定方法，其特征在于：步骤（3）供试品溶液的制备为：精密称定鸡眼睛药材粉末约1g，置于索氏提取器中，加甲醇提取2～8h，用少量甲醇洗涤提取器，洗液与提取液合并、浓缩并转移至量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。