[发明专利]一种黄连碱单体的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及从植物中分离化合物单体的方法技术领域，尤其是一种黄连碱单体的分离 纯化方法。

背景技术

黄连(Rhizoma coptidis)为毛茛科黄连属植物黄连(Coptis chinensis Franch.) 、三角叶黄连(Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao)或云连(Coptis teeta Wall.)的干燥根茎，分别习称“味连”、“雅连”、“云连”。黄连性味苦寒，归心、 脾、胃、肝、胆、大肠经，具有清热燥湿，泻火解毒的功效。用于湿热痞满，呕吐吞酸， 泻痢，黄疸，高热神昏，心火亢盛，心烦不寐，目赤，牙痛，消渴，痈肿疔疮；外治湿疹 ，湿疮，耳道流脓。

黄连碱是黄连的特征性化学成分，也是黄连中活性最高的原小檗碱型生物碱，其英文 名为Coptisine，化学名为：Bis[1，3]benzodioxolo[5，6-a：4’，5’-g] quinolizinium，6，7-dihydro-，分子式为C₁₉H₁₄NO₄⁺，分子量为320.32，属于原小檗碱型生 物碱，其结构式如下：

由于黄连碱是黄连的特征性化学成分，如果能以黄连碱作为该药材及其相关制剂的质 量评价指标，既能较真实地反映其质量又具有专属性，可对黄连药材及其制剂的质量控制 起到重要作用。

但是，发明人通过检索大量文献现，目前只有关于黄连中总生物碱的提取或小檗碱 的分离纯化报道，如中国专利申请200810069671.8公开了“一种黄连总生物碱提取工艺” ，中国专利申请200710098436.9公开了“一种从中药提取物中分离小檗碱类总生物碱的方 法”等，未见与黄连碱单体分离工艺的相关报道。究其原因，与黄连碱的性质和黄连中其 它原小檗碱型生物碱的干扰有关，常规分离纯化方法不能有效的将它们进行分离。从黄连 药材的HPLC分析图谱(如图1所示，参考文献：高效液相色谱法测定黄连药材中小檗碱型生 物碱的含量，药物分析杂志，2003，23(5))可以看到，黄连碱峰的前面分别为药根碱和表小 檗碱，后面分别为巴马亭和小檗碱，5个峰的保留时间很接近；其原因是这几个化合物的 结构相近，其理化性质也比较相近，对于常规的分离介质，如硅胶、氧化铝、大孔树脂、 聚酰胺等，都不能将它们很好分离。因此，迄今为止，尚没有可有效分离制备黄连碱的成 熟工艺报道，更没有高纯度的黄连碱单体化合物面市。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中无高纯度黄连碱的分离制备方法、因而缺少高 纯度黄连碱单体化合物、无法通过黄连碱的含量测定加强对黄连药材及其制剂的质量控制 等问题，提供一种黄连碱单体的分离纯化方法。该方法操作简便，生产周期短，分离效率 高，工艺稳定，成本低廉，可实现大量黄连碱单体的高纯度分离制备，得到的黄连碱单体 纯度高，可作为含量测定的对照品使用。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种黄连碱单体的分离纯化方法，包括下述主要步骤：

(1)、提取：

将黄连药材粉碎成粗粉，按照药材重量∶乙醇溶液体积＝1Kg∶(8～10)L计算，加入体 积百分比为85～95％的乙醇溶液，回流提取3～4次，每次2～3小时，过滤，收集、合并滤 液。

本步骤通过乙醇回流提取，得到的提取液(滤液)中主要含有小檗碱、黄连碱等总生 物碱成分。

(2)、浓缩：

将步骤(1)收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.05～1.10g/mL(约90 ℃测定)，静置析晶8～12小时，过滤，除去沉淀物(沉淀物中的晶体为小檗碱，可纯化 制得小檗碱产品)，黄连碱主要保留在滤液中，将滤液进行下一步萃取处理。

(3)、萃取：

向步骤(2)的滤液中加入氨水调pH8.0～9.0，然后加入等体积氯仿萃取3～4次，合 并氯仿层，回收氯仿，固体残渣中主要含黄连碱，待下一步处理。

本步骤中水层主要除去极性较大的杂质。

(4)、溶解、过滤：

按照固体物质量∶溶剂体积＝1g∶4～6ml，将步骤(3)萃取后所得的固体残渣加吡啶、 或四氢呋喃、或DMF溶解，溶解后的溶液用纳米膜过滤，滤除颗粒杂质，以免堵塞制备色 谱柱，滤液作为下一步制备黄连碱单体的原料。

(5)、高效制备液相色谱分离：