[发明专利]使用β-丙内酯(BLP)进行最终灭活的细菌菌影(BG)生产方法

权利要求书

1.一种生产细菌菌影制备物的方法，包括以β-丙内酯处理所述细菌菌影。

2.权利要求1的方法，包括以下步骤：

(a)生产细菌菌影制备物；和

(b)然后在其中所述菌影制备物中任意残余的活体细菌细胞的数目被降低的条件下以β-丙内酯处理所述细菌菌影制备物。

3.权利要求1或2的方法，其中所述菌影制备物中的任意残余的活体细菌细胞的数目降低至少10³-10⁴倍、优选降低至少10⁵或10⁶倍。

4.权利要求1-3的方法，其中以终浓度为0.01-1％(v/v)，优选为0.025-0.5％的β-丙内酯处理细菌菌影。

5.权利要求1-4的方法，其中在两个连续步骤中加入β-丙内酯。

6.权利要求1-5的方法，其中在26-50℃，更优选在35-45℃，再更优选在38-43℃加入β-丙内酯。

7.权利要求1-6的方法，其中将细菌菌影灭活10-60分钟，更优选为15-45分钟，再更优选为25-35分钟。

8.权利要求1-7任一项的方法，其中通过以下步骤获得所述细菌菌影制备物：

(a)提供包含编码能够在细菌细胞被膜复合物中形成通道结构的裂解蛋白的基因的细菌细胞；

(b)可选地在其中裂解基因不表达的条件下培养细菌细胞；

(c)将细菌细胞置于其中裂解基因被表达且细菌细胞的细胞质成分被释放的条件；和

(d)获得所产生的细菌菌影。

9.权利要求8的方法，其中编码所述裂解蛋白的基因是噬菌体phiX174基因E。

10.权利要求8或9的方法，其中所述细菌细胞另外编码能够水解细菌细胞中的细胞质成分的酶，所述方法包括以下步骤：

(a)可选地在其中所述酶基因不表达的条件下培养细菌细胞；

(b)将细菌细胞置于该酶基因被表达且细菌细胞的细胞质成分被降解的条件。

11.权利要求10的方法，其中编码所述水解酶的基因是核酸酶基因，优选为金黄色葡萄球菌核酸酶基因。

12.权利要求8-11任一项的方法，其中所述裂解基因和所述酶基因与可调控的表达控制序列可操作地连接。

13.权利要求12的方法，其中所述裂解基因和所述酶基因每个均与单独的可调控的表达控制序列可操作地连接并处于一个或几个载体中。

14.权利要求13的方法，其中在不同时间诱导所述裂解基因的表达和所述酶的表达。

15.一种药物组合物，其包含经β-丙内酯处理的细菌菌影制备物和药学上可接受的载体、稀释剂和/或佐剂。

16.权利要求15的组合物，其为疫苗。

17.权利要求15的组合物，其为佐剂。

18.权利要求15-17任一项的组合物，用于人类医药。

19.权利要求15-17任一项的组合物，用于兽用医药。

20.β-丙内酯在制备细菌菌影制备物中的用途。

21.权利要求20的用途，其中细菌菌影制备物是药物制备物。