[发明专利]促卵泡激素的液体制剂

说明书

本发明涉及包含促卵泡激素多肽和作为防腐剂的苯扎氯铵和苯甲醇的液体药物组合物。组合物还任选地包含一种或多种其他的可药用赋形剂。在一个实施方案中，组合物含有作为抗氧化剂的甲硫氨酸。组合物表现出良好的储藏稳定性，并且特别用于其中促卵泡激素制剂被视为有效疗法的病症和医学适应症的预防和治疗。

促卵泡激素(FSH)由垂体前叶的促性腺激素细胞产生并释放到循环系统中。FSH与促黄体激素(LH)一同控制女性的卵母细胞成熟和男性的精子发生。FSH和LH都属于由2个非共价连接的由不同基因编码的α-和β-链组成的异源二聚体糖蛋白家族。α-和β-链都是糖基化的。α-亚基由92个氨基酸残基组成，而β-亚基由111个氨基酸残基组成，它们各自都有2个潜在的连接天冬酰胺的糖基化位点。

人FSH用于治疗不排卵的女性、用于刺激多卵泡发生(超数排卵)和用于例如IVF、ICSI、GIFT或CIFT的辅助受孕的制剂。此外，人FSH用于刺激FSH生成量低或不产生FSH的女性的卵泡成熟和用于刺激患有先天的或后天的低促性腺素性功能减退症的男性的精子发生。

直到20世纪80年代，人FSH的主要来源是从孕龄妇女的尿液分离出来的尿源FSH。在20世纪90年代引入了高纯度的尿源FSH的进一步纯化的形式，并且最终从1998年起开发出重组FSH并得到广泛应用。随着重组DNA技术的出现，在被编码α-和β-链的核酸序列转染的细胞培养物中生产人FSH成为可能。在例如WO 88/10270、WO 86/04589和EP 0 735 139中已经公开了编码α-和β-链的DNA序列以及生产重组FSH的方法。

目前，在德国市场上有两种商品化的重组人FSH产品，GONAL-f和Puregon，两者都是通过在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达编码人野生型α-和β-链的DNA序列来生产的。

通常，蛋白质的半衰期非常短，并且当蛋白质暴露于各种因素(例如不适宜蛋白质活性表达的温度、水、空气界面、高压、物理/机械胁迫、有机溶剂和微生物污染)时，其发生变性，例如单体的聚集、二聚体的解离、和吸附在容器表面上。

因此，变性蛋白丧失了内在的物理化学性质和生理活性作用。蛋白质的变性是不可逆的，因此，蛋白质一旦变性就几乎不能恢复其天然的性质而回到初始状态。

具体地讲，具有由2个不同亚基组成的异源二聚体结构并且每次以低于几百微克的痕量进行给药的蛋白质(例如人FSH)遭受了与相对高的蛋白损失有关的问题，包括因在水溶液中二聚体离解和蛋白质吸附在容器内表面上而引起的蛋白损失。离解的蛋白质丧失了其自身的生理活性，并且离解的单体非常易于聚集。而且，吸附在容器内表面上的蛋白质也非常容易通过变性过程聚集。当将其向人体给药时，如此变性的蛋白质可以成为形成对抗体内天然存在的蛋白质的抗体的诱因。

某些蛋白药物制剂已经通过冷冻干燥(冻干)克服了稳定性问题。虽然这些冻干制剂足够稳定以致能保证足够的半衰期，但是其具有在给药前必须进行重构(reconstitution)的缺点。因此，患者在使用前必须在溶剂(例如注射用水)中重构干燥的糖蛋白，这对于患者而言是缺点和不方便。此外，必须与FSH的冻干制剂一起提供溶剂。对于需要有规律地注射FSH的患者，例如为了诱导排卵而接受每日剂量的重组人FSH的患者，促性腺素制剂的易于处理、给药和注射是重要的。冻干的促性腺素制剂的重构要谨慎和小心，并且如果可能的话应避免重构。如果能够生产这些糖蛋白并将其分装为稳定的溶液，使患者无需重构就可直接注射药物，这将为促性腺素的使用提供便利。此外，冻干过程是费钱和耗时的加工步骤，如果在制备促性腺素制剂时能够避免该步骤，这将是有利的。

因此，需要即时可用(ready-for-use)的注射制剂，该制剂具有足够的稳定性从而保证合理的贮藏期。

作为应对这些限制的可选择的措施，可以通过向溶液状态的蛋白质加入稳定剂来改善蛋白质的稳定性。有用的蛋白质稳定剂的实例有已知的表面活性剂、蛋白质(例如白蛋白)、多糖、氨基酸、聚合物、盐等。然而，考虑到各种蛋白质的独特的物理化学性质，应该选择并使用最合适的稳定剂。而且，由于不同稳定剂之间的竞争作用和不良反应，不同稳定剂的联合使用可能带来预想的不良副作用。此外，由于不同的稳定剂具有特定的对稳定相应蛋白质有利的浓度范围，存在于溶液中的蛋白质的成功稳定还需要认真关注和很多努力。