[发明专利]宫颈癌疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及人宫颈癌的药物疫苗组合物，预防人宫颈癌的方法，及制备人乳头瘤病毒(HPV)的L1病毒样颗粒(VLP)的方法。

背景技术

已知多于80种类型的人乳头瘤病毒(HPV)，及约30类型通过性接触引发宫颈感染，已知其中一半类型与宫颈癌相关(Zur HausenH，Mol.Carcinogenesis 8：147-150(1988))。其中，已知被16及18型HPV感染的女性的患癌率比正常女性高约500倍，且16及18型HPV感染生殖器官上皮细胞，经恶性转化引发宫颈癌(Zur Hausen H，Mol.Carcinogenesis 8：147-150(1988)；Hausen，Biochemica.Biophysica.Acta.1288：55-78(1996))。

目前已使用高危型HPV病毒样颗粒(VLP)开发了预防宫颈癌的疫苗。VLP是HPV的主衣壳蛋白(L1蛋白，约55kDa)，且作为疫苗候选物具有各种优势，包括：(a)无需其他病毒基因产物(如见于天然HPV病毒粒子)自装配成VLP的能力；(b)持续长期免疫；及(c)由于针对基因型的类型特异性而高效。

使用VLP的‘Gardasil’(Merck&Co.，Inc.)是使用针对最常见的6、11、16及18型HPV的各抗原，及使用‘Alum’作为免疫佐剂开发的疫苗。‘Cervarix’(GlaxoSmithKline Plc.)是使用作为引发宫颈癌的代表性因子的16及18型HPV，及使用独立开发的‘AS04’作为免疫佐剂开发的疫苗。

在‘gardasil’中用作免疫佐剂的Alum已被用于白喉、破伤风及乙型肝炎病毒疫苗，且据报道Alum增强抗原稳定性及诱导细胞因子释放。但是，gardasil的使用受到以下限制：(a)使不可能冻干或冷冻 疫苗；(b)并非对所有抗原有效；及(c)其仅促进体液免疫应答。

以诱导强力及持久的免疫应答为目的开发了含于GSK的Cervarix的AS04，其由氢氧化铝及单磷酰脂质A(MPL)组成。本文中的术语“MPL”指能直接活化关键免疫应答的免疫刺激物质，发挥增强针对含于疫苗的抗原的免疫应答的作用。

免疫佐剂最近受到注目，其用于各种疫苗(例如宫颈癌疫苗及流感疫苗)。其中，细菌DNA作为抗癌剂自上世纪60年代开始受到注目，且持续研究至今。但是，细菌DNA由于其低功效而未能单独用作抗癌剂(Glick，J.L.The specificity of inhibition of tumor cellviability by DNA.Cancer Res.27：2338(1967))。尽管有此缺陷，已证实，已知细菌DNA无严重副作用地活化各种免疫细胞，且作为佐剂具有许多优势(McCluskie MJ，et al.， CpG DNA is a potentenhancer of systemic and mucosal immune responses against hepatitisB surface anti

对于细菌DNA的这些效果，日本的Yamamoto等人主张含CG的重复序列在细菌DNA的效果中起重要作用，这也被Krieg等人证实(Yamamoto S.et al.Unique palindromic sequences in syntheticoligonucleotides are required to induce IFN and augmentIFN-mediated natural killer activity.J.Immunol.148：4072(1992)；Krieg AM，Antitumor applications of stimulating toll-like receptor 9with CpG oligodeoxynucleotides.Curr.Oncol.Rep.Mar；6(2)：88-95(2004))。自上世纪90年代中期，CpG的相关研究显示了将含未甲基化的CG的合成的DNA(CpG-ODN)作为抗癌剂的DNA抗癌剂的可能性，尤其研究了抑制短合成的DNA降解的二酯键中的S取代。通过这些努力，CpG-ODN相关产品不仅作为佐剂，也作为抗癌剂用于临床试验(http://www.coleypharma.com)。