[发明专利]病毒浓缩方法

说明书

技术领域

本发明涉及能够在保持其感染能力的同时对病毒、病毒载体进行浓缩的新方法，以及用于进行该方法的试剂盒。本发明涉及逆转录病毒载体、疱疹病毒载体等、对基因治疗、疫苗等有用的载体的安全且简便的浓缩技术。

背景技术

目前为止，出于基因治疗、疫苗治疗目的，开发出了各种病毒载体，其成果值得期待。但是，如果病毒载体浓度低，则无法充分地获得期望的效果，因而有调整浓度的必要。在基因治疗领域中，针对细胞的基因导入效率左右着治疗的成败，因此，使用基因导入效率高的病毒载体。但是，对于包括慢病毒载体在内的逆转录病毒载体等而言，尚未获得效价高的病毒，因而无法获得充分的基因导入效率。因此，开发出了各种病毒浓缩技术、以及利用该技术得到的制品，但现状是在实用方面还存在多种问题。

作为提高溶液中病毒的浓度、对病毒进行浓缩的方法，可以列举出例如超离心分离法。但是，该方法需要昂贵的仪器和漫长的分离时间，且作业中需要大量的劳力。此外，还有用硫酸铵、聚乙二醇等沉淀病毒来进行浓缩的方法，但这些方法中，由于使用的试剂或进行沉淀的其它成分对感染细胞有害等原因，存在阻碍后续操作的隐患。因此，存在的问题是：病毒沉淀后必须对试样进行纯化，需要大量的劳力。此外，还开发出了使用抗体来浓缩病毒粒子本身的方法(特开2002-78485)。但是，该方法抑制病毒表面的蛋白质功能，存在对病毒的感染性造成影响的隐患。例如，将病毒粒子从抗体分离时，必须要使用强酸性条件(例如pH2～3)，这就存在给病毒粒子造成不适的隐患。

作为其它的病毒浓缩方法，公开了例如使用结合有甘露糖结合型凝集素的磁性粒子的方法(特开2002-165591)。

而且，作为提高逆转录病毒的效价、或者从待检物样品分离逆转录病毒的方法，还公开了利用链霉抗生物素蛋白与生物素化凝集素的方法(WO2001/079456)。但是，在上述的任何文献中，病毒均是以与载体结合的形式使用，无法分离出病毒本身。因此，采用这些方法浓缩的病毒的用途受到了限制。

现有技术文献

专利文献1特开2002-078485号公报

专利文献2特开2002-165591号公报

专利文献3国际申请公开第WO2001/079456号小册子

发明内容

发明所要解决的问题

在对体液中的病毒进行定量时，如果浓度低至现有方法的检测限以下，则有时无法进行定量。此外，在将病毒载体应用于基因治疗、疫苗治疗等时，如果病毒载体浓度小，则无法获得期望的效果，因此存在调整浓度的必要。

本发明的目的是提供：一种能够以简洁的方法浓缩溶液中的病毒、病毒载体的方法。此外，本发明的目的还在于提供：从浓度低的病毒溶液中在保持病毒、病毒载体的感染能力的同时，简单容易地对病毒、病毒载体进行浓缩，并以已分离的状态获取病毒、病毒载体的方法。本发明的目的还在于提供：安全且简便地对逆转录病毒载体、疱疹病毒载体等在基因治疗、疫苗等中有用的病毒载体进行浓缩的技术。

解决问题的方法

为解决上述课题，本发明人等进行了深入研究，结果开发出了能够以简洁的方法对溶液中的病毒、病毒载体进行浓缩的技术。更具体地，本发明人等通过使凝集素与含目标病毒液结合、再使病毒-凝集素复合体与载体结合，然后分离并回收结合了病毒的该载体，并加入糖，仅将对象病毒从该载体洗脱到适量的溶液中，而不使其失去感染能力，从而成功制备使其浓度高于最初的含病毒液的浓度。

此外，本发明人等发现：对于人疱疹病毒，通过使用SBA(大豆来源，结合糖链：含N-乙酰半乳糖胺(N-acetylgalactosamine)(GalNAc)的糖链)、SSA(无梗接骨木(ニホンニワトコ，Sambucus racemosa)来源，结合糖链：含α2-6键的唾液酸(α2-6合のシアル)(Siaα2-6)的糖链)、DSA(白曼陀罗(チヨウセンアサガオ，Datura metel)来源，结合糖链：含N-乙酰葡糖胺(N-acetylglucosamine)(GlcNAc)的糖链)、WGA(小麦胚芽来源，结合糖链：含N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)或唾液酸的糖链)作为凝集素，病毒载体的回收率显著提高。

此外，还发现：对于慢病毒载体，通过使用WGA或SBA作为凝集素，病毒载体的回收率显著提高。