[发明专利]利用红细胞内含有的血红蛋白的本征色素沉着来确定血样的红细胞指数的方法及设备

说明书

本申请要求以下美国临时专利申请的优先权：2008年3月21日提交的No.61/038,557；2008年3月21日提交的No.61/038,574；2008年3月21日提交的No.61/038,545；和2008年3月21日提交的No.61/038,559，这些临时专利申请在此以引文方式整体并入本申请。

技术领域

本发明总的来说涉及分析血样的设备及方法，具体地讲，涉及确定样本的红细胞体积以及平均细胞体积的设备及方法。

背景技术

内科医生、兽医和科学家检查人类和动物的生物流体(尤其是血液)，以确定组分的微粒数量以及识别是否存在在健康的受试者中没有发现的异常微粒。通常被测量、定量和识别的微粒包括红细胞(RBC)、白细胞(WBC)和血小板。RBC分析包括确定RBC数目、大小、体积、形状、血红蛋白含量和浓度、以及血细胞比容(也被称为红细胞压积)。RBC分析还可以包括确定红细胞(诸如DNA，RNA)内是否存在某些成分和/或确定这些成分的浓度，包括检测RBC中是否存在和/或存在多少血液寄生虫(例如疟原虫)或者检测WBC中是否存在和/或存在多少细胞外的或利什曼原虫组织的睡病虫，以及检测是否存在和/或存在多少其他血液寄生虫。WBC分析可以包括确定WBC子类型的族群(population)频率，通常称为分类WBC计数，以及通知任何在健康的受试者中没有发现的异常细胞类型。血小板(或者在包括鸟、爬行动物和鱼的某些动物中为凝血细胞(thrombocyte)，该凝血细胞在功能上类似于哺乳动物的血小板，但是比哺乳动物的血小板大约10倍且是有核的)分析可以包括对血小板数目、大小、形状结构和体积的确定，包括确定样本中是否存在血小板或凝血细胞的凝块。

在诸如Wintrobe’s Clinical Hematology第12版的医学文献中详细描述的已知的血液检查技术通常将检查方法分为手动、离心和阻抗型方法。用于细胞计数的手动方法通常涉及产生精确确定的血液或流体样本的体积，该血液或流体样本被定量稀释并且在计数室中被直观计数。手动检查方法包括检查其中通过目测确定微粒类型的相对量的外周涂片。离心检查方法涉及对样本进行离心，使得根据组分的相对密度将样本分成多个组分层。可以给组分层染色，以增强可见性或检测性。阻抗型方法涉及检查根据被测量的颗粒而经过处理的血液的精确体积；例如溶解RBC来计数有核细胞以及在导电流体中体积(volumetrically)稀释样本。该过程通常涉及监视施加给通过窄通道的样本的电流或电压，以确定当微粒以单行通过时微粒对电流/电压的影响。其他技术涉及对通过光束入射到以单行通过的微粒的光的强度和散射角的分析。还可以使用流式细胞测定法，该方法涉及利用附着于针对细胞或微粒类型上存在的表面抗原决定簇的抗体的荧光基团给悬浮中的感兴趣的微粒染色、用适当波长的光激发染色微粒、以及分析各个微粒/细胞的发光(emission)。

除了外周涂片或离心分离之外，上述所有方法都要求滴涂精确的样本体积。样本体积的不精确将导致相关分析中同一数量的定量误差。除了离心方法之外，上述所有方法还都要求样本与一种或多种液体试剂或稀释剂混合，并且为了获得精确的结果还要求对仪器进行校准。在外周涂片的情况下，需要高度训练来正确地检查涂片。上述的许多方法产生大量的污染物，而处理这些污染物是昂贵的。另外，上述方法不适于确定其中红细胞和凝血细胞有核的鸟、爬行动物和鱼中的以及其中红细胞尺寸非常小并且可能与血小板混淆的某些哺乳动物中的全血计数(CBC)。

可以通过检查人类或动物的血液确定的信息量是巨大的。确定RBC指数尤其有用；例如，单个细胞大小、单个细胞血红蛋白含量和浓度、以及样本内的RBC的族群统计。如上述引用的Wintrobe的文献中的讨论所表明，对于上述参数中的每种参数的平均和离差统计(例如，变异系数)还可以提供重要信息，这已经使得外科医生能够对RBC紊乱进行更好地分类。

发明内容

根据本发明，提供了一种确定RBC指数的方法，RBC指数包括单个RBC的体积、以及血红蛋白含量和浓度；以及RBC族群统计，包括样本中存在的RBC的总量，和基本上未稀释的血液样本内的上述每个指数的平均值。