[发明专利]筛选产生生物活性剂的单细胞的方法

权利要求书

1.一种从感兴趣的分离细胞获得信息的方法，包括以下步骤：

将多个单独细胞放置在多个单独孔中，其中每个细胞产生至少一种感兴趣的生物活性剂；

将所述孔中的所述至少一种感兴趣的生物活性剂与附加至少一种结合剂的固体表面接触，其中所述至少一种结合剂选择性地结合所述至少一种感兴趣的生物活性剂，且所述固体表面包含可与所述单独孔关联的可寻址区；

确定关于所述一种或多种感兴趣的生物活性剂与靶结合蛋白结合的结合信息；并

将所述结合信息与所述固体表面的特定寻址区关联，从而鉴定特别感兴趣的孔。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞为在所述多个单独孔的每个单独孔中大体上相同的。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述细胞选自以下组成的组：原代细胞、来自细胞系的细胞和工程化细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞为在所述多个单独孔的每个单独孔中不同的。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述细胞选自以下组成的组：浆细胞、来自同一人类受治疗者的不同细胞类型、和来自不同人类受治疗者的相同细胞种类。

6.根据权利要求1所述的方法，其中结合到固体表面的所述至少一种结合剂选自以下组成的组：蛋白A、蛋白G、蛋白L、蛋白A/G、抗IgG Fcγ亚类特异性抗体、和由所述细胞产生的所述至少一种生物活性剂的靶结合蛋白。

7.根据权利要求1所述的方法，还包括：

向所述孔中的所述细胞加入生物活性剂。

8.根据权利要求7所述的方法，其中向所述细胞加入不同生物活性剂。

9.根据权利要求7所述的方法，其中向所述细胞加入相同生物活性剂。

10.根据权利要求7所述的方法，其中加入所述细胞的所述生物活性剂选自以下组成的组：小分子化合物、siRNA、蛋白和寡核苷酸。

11.根据权利要求7所述的方法，还包括：

获得编码来自所述特别感兴趣的孔的细胞产生的至少一种感兴趣的生物活性剂的核苷酸序列；并

将关于细胞产生的所述感兴趣的生物活性剂的结合性质的信息与编码所述感兴趣的生物活性剂的核苷酸序列关联。

12.根据权利要求11所述的方法，其中获得所述核苷酸序列的步骤包括：

从所述细胞获得mRNA；

从所述mRNA合成cDNA并在所述cDNA中掺入独特的孔特异性标签；并

将所述cDNA测序。

13.根据权利要求12所述的方法，还包括：

汇集包含所述标签的所述cDNA序列并同时将所述汇集的cDNA序列测序。

14.根据权利要求1所述的方法，其中将10,000或更多单独细胞放置在相应数目的单独孔中，且所述固体表面中有相应数目的寻址区；且

其中所述孔是以大于100微孔/cm²的密度互连的微孔，并且其中所述孔是微孔且每个微孔具有1皮升和500纳升之间的容积。

15.一种方法，包括以下步骤：

将来自细胞群的多个单独细胞放置在多个单独孔中，其中所述细胞产生至少一种感兴趣的生物活性剂；

分离感兴趣的生物活性剂；并

从特别感兴趣的孔获得编码所述感兴趣的生物活性剂的核苷酸序列；并

将感兴趣的所述序列与感兴趣的所述剂关联，其中将5,000或更多细胞放置在包括5,000或更多孔的孔托盘的孔中，并且其中筛选所述孔中剂的感兴趣的特征。

16.根据权利要求15所述的方法，其中细胞产生的所述感兴趣的生物活性剂是抗体。

17.根据权利要求16所述的方法，其中获得所述核苷酸序列包括获得所述抗体的重链和轻链的核苷酸序列。

18.根据权利要求17所述的方法，还包括：

采用所述核苷酸序列来产生关于所述感兴趣的生物活性剂的元数据。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述元数据包括基于所述核苷酸序列，所述感兴趣的生物活性剂的结合性质。

20.根据权利要求18所述的方法，其中所述元数据包括基于所述细胞群中所述核苷酸序列的出现频率，所述细胞群中所述感兴趣的生物活性剂的出现频率。