[发明专利]木糖还原酶的改造和木糖醇脱氢酶与木酮糖激酶的过表达促进耐热酵母菌多形汉逊酵母中的木糖乙醇发酵

权利要求书

1.一种重组多形汉逊酵母(H.polymorpha)菌株，所述菌株包括至少一种重组核酸，所述重组核酸单一地或组合地包括至少一种编码木糖醇脱氢酶的基因、至少一种编码具有对NAD(H)比对NADP(H)高的结合亲和力的木糖还原酶的基因，和至少一种编码木酮糖激酶的基因，所述基因中的每一种被可操作地连接到至少一种在所述多形汉逊酵母菌株中过表达所述基因的启动子，且其中，与不含所述基因的亲代多形汉逊酵母菌株相比，所述重组多形汉逊酵母菌株在包含木糖的培养基中发酵时产生更大量的乙醇。

2.如权利要求1所述的重组多形汉逊酵母菌株，其中所述重组核酸的所述基因中的每一种被整合到多形汉逊酵母染色体中。

3.如权利要求1所述的重组多形汉逊酵母菌株，其中所述多形汉逊酵母菌株具有使至少一种编码木糖还原酶的天然基因不可操作的突变。

4.如权利要求1所述的重组多形汉逊酵母菌株，其中相对于所述亲代多形汉逊酵母菌株，所述多形汉逊酵母菌株中的所述基因中的每一种被过表达。

5.如权利要求1所述的重组多形汉逊酵母菌株，所述菌株还包括至少一种编码丙酮酸脱羧酶的序列，所述序列可操作地连接到在所述重组多形汉逊酵母菌株中过表达所述丙酮酸脱羧酶的启动子。

6.如权利要求1所述的重组多形汉逊酵母菌株，其中至少一种启动子包括从多形汉逊酵母获得的HpGAP启动子。

7.如权利要求1所述的重组多形汉逊酵母菌株，其中所述重组木糖还原酶基因是天然多形汉逊酵母木糖还原酶基因的突变体。

8.如权利要求7所述的重组多形汉逊酵母菌株，其中所述木糖还原酶基因具有在所述天然多形汉逊酵母木糖还原酶基因中将编码位置341赖氨酸的第一密码子变为编码精氨酸的密码子的突变，以及将表达位置343天冬酰胺的第二密码子变为编码天冬氨酸的密码子的突变。

9.一种制造乙醇的方法，所述方法包括在使得重组多形汉逊酵母制造乙醇的条件下，在包括木糖的培养基中培养权利要求1-8中任一项所述的重组多形汉逊酵母菌株。

10.一种重组核酸，所述重组核酸包括来自多形汉逊酵母的编码木糖还原酶基因的序列。

11.如权利要求10所述的重组核酸，其中所述编码木糖还原酶的序列编码根据序列ID号：1的NADPH/NADH结合结构域。

12.如权利要求10所述的重组核酸，其中所述编码木糖还原酶的序列编码根据序列ID号：2的NADPH/NADH结合结构域。

13.如权利要求10所述的重组核酸，所述重组核酸根据序列ID号：3。

14.如权利要求10所述的重组核酸，所述重组核酸编码根据序列ID号：4的蛋白质。

15.权利要求10所述的重组核酸，所述重组核酸编码除了在根据序列ID号：2的NADPH/NADH结合结构域具有突变的根据序列ID号：4的蛋白质。