[发明专利]通过RNA干扰引入复能基因而重编程细胞

权利要求书

1.一种重编程细胞的方法，所述方法包括：将细胞暴露于干扰编码调节蛋白的基因表达的shRNA构建体；诱导复能基因的表达；以及选择细胞，其中所述细胞已恢复分化潜能。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述选择所述细胞包括：比较所述细胞暴露于所述shRNA构建体之前和之后的表型，以及鉴定具有与恢复的分化潜能一致的表型的细胞。

3.如权利要求1所述的方法，所述方法还包括：将选择的细胞扩增为细胞群。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述选择细胞包括：使用针对于由复能基因编码的蛋白的抗体或针对于细胞表面标记物的抗体分离细胞。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述细胞表面标记物选自由下列组成的组：SSEA3、SSEA4、Tra-1-60和Tra-1-81。

6.如权利要求1所述的方法，所述方法还包括：在选择所述细胞之前，比较暴露于所述shRNA构建体之前所述复能基因的染色质结构与暴露于shRNA构建体之后所获得的染色质结构。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述基因编码选自由下列组成的组的调节蛋白：DNA甲基转移酶、组蛋白脱乙酰酶、赖氨酸甲基转移酶、组蛋白脱甲基酶、赖氨酸脱甲基酶、sirtuin、甲基结合结构域蛋白、组蛋白甲基转移酶。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述复能基因选自由下列组成的组：Oct-4、Sox-2和Nanog。

9.一种重编程细胞的方法，所述方法包括：将具有第一转录模式的细胞暴露于小分子抑制剂；诱导复能基因的表达；比较细胞的所述第一转录模式与暴露于所述抑制剂之后所获得的转录模式；以及选择细胞，其中所述细胞已恢复分化潜能。

10.如权利要求9所述的方法，其中暴露于所述抑制剂之后的所述转录模式与从胚胎干细胞分析的基因的转录模式至少50％相似。

11.如权利要求9所述的方法，其中在比较转录模式之前，比较所述细胞暴露于所述shRNA构建体之前和之后的表型。

12.如权利要求9所述的方法，所述方法还包括：将选择的细胞扩增为细胞群。

13.如权利要求9所述的方法，其中选择所述细胞包括：使用针对于由复能基因编码的蛋白的抗体或针对于复能标记物的抗体分离细胞。

14.如权利要求9所述的方法，其中选择所述细胞包括：使用报道分子或对选择标记物的抗性分离细胞。

15.如权利要求9所述的方法，其中所述复能基因选自由下列组成的组：Oct-4、Sox-2和Nanog。

16.一种富集的重编程的细胞群，所述重编程的细胞群根据包括下列步骤的方法制备：将细胞暴露于干扰编码调节蛋白的基因表达的shRNA构建体；诱导复能基因的表达；以及选择细胞，其中所述细胞已恢复分化潜能。

17.如权利要求16所述的富集的重编程的细胞群，其中所述重编程的细胞表达选自由下列组成的组的细胞表面标记物：SSEA3、SSEA4、Tra-1-60和Tra-1-81。

18.如权利要求16所述的富集的重编程的细胞群，其中所述复能基因选自由下列组成的组：Oct-4、Nanog和Sox-2。

19.如权利要求16所述的富集的重编程的细胞群，其中所述重编程的细胞占所述群的至少60％。