[发明专利]乙酰肝素酶缺陷的非人类哺乳动物

权利要求书

1.一种转基因非人类哺乳动物，所述转基因非人类哺乳动物具有至少一个缺损的乙酰肝素酶等位基因。

2.如权利要求1所述的转基因非人类动物，其中，所述缺损的乙酰肝素酶等位基因缺乏启动子和外显子1。

3.如权利要求2所述的转基因非人类动物，其中，所述缺损的乙酰肝素酶基因缺乏HindIII-XbaI片段。

4.如权利要求1～3中任一项所述的转基因非人类动物，所述动物就乙酰肝素酶基因的缺损而言是纯合性的。

5.一种分离细胞，所述分离细胞源自权利要求1～4中任一项所述的转基因非人类哺乳动物。

6.一种权利要求1所述的转基因非人类哺乳动物的制备方法，所述方法包括

a)通过在非人类哺乳动物胚胎干细胞中的同源重组来删除部分乙酰肝素酶基因；

b)将步骤a)中得到的细胞植入分离的胚泡；

c)将所述胚泡移植至假孕的非人类哺乳动物内；

d)让所述移植胚泡发育成转基因非人类哺乳动物；

e)将所述转基因非人类动物育种以产生后代；和

f)对所述后代进行筛选以鉴定出具有至少一个缺损的乙酰肝素酶等位基因的转基因非人类哺乳动物。

7.如权利要求6所述的方法，其中，在a)中删除的所述部分包含SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

8.一种用于制备权利要求1所述的转基因非人类哺乳动物的载体，所述载体包含编码乙酰肝素酶敲除构建体的核酸序列，其中所述乙酰肝素酶编码序列的一个外显子的至少一部分被选择性标记物序列所替代。

9.如权利要求8所述的载体，其中，所述选择性标记物序列包含新霉素抗性基因。

10.一种治疗性药物候选物的筛选方法，所述方法包括

a)提供权利要求1所述的转基因非人类哺乳动物；

b)使所述哺乳动物接触疾病刺激物；

c)对所述哺乳动物施用所述药物候选物；和

d)对所述动物由所述疾病刺激物诱导的疾病的发展进行分析。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述疾病刺激物包含接种的肿瘤细胞，且所述步骤d)包括确定任何肿瘤转移的形成。

12.如权利要求10所述的方法，其中所述疾病刺激物是炎症刺激物，且所述步骤d)包括确定任何炎症响应的水平。

13.如权利要求10所述的方法，其中所述疾病刺激物诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎。

14.如权利要求10所述的方法，其中所述疾病刺激物诱导过敏反应。

15.如权利要求10～14中任一项所述的方法，所述方法还包括将所获得的结果与在野生型非人类哺乳动物中获得的相应结果进行比较。