[发明专利]产生富含分泌型免疫球蛋白的乳组分的方法

说明书

发明领域

本发明涉及通过对含有S-IgA的乳进行分级而产生富含分泌型IgA(S-IgA)的组合物的方法。例如，通过将所述组合物合并入药品、食物产品或者美容产品，可将该组合物特别用于在有以下治疗需要的人或者动物体中，治疗和/或预防诸如胃肠道、泌尿生殖道、呼吸道、鼻腔或者口腔的粘膜表面的感染和/或炎症、治疗和/或预防肥胖症及相关疾病或者治疗和/或预防食物过敏症中的一个或者多个。本发明特别涉及产生该乳组分的方法，所述方法包括脱脂、过滤和浓缩步骤。本发明还涉及可通过本方法获得的乳组分、含有该乳组分的产品以及所述产品的用途。

发明背景

抗体在科学和医学上有很多应用。产生针对靶标的新抗体是非常容易的。对于大多数应用，抗体由所谓的杂交瘤细胞系产生，所述杂交瘤细胞系来自产生抗体的B细胞与永生化细胞系的融合。可容易地培养这些杂交瘤细胞并且可以从培养上清收获抗体。产生抗体的另一个方法是从免疫的动物的血清中收获。家畜繁殖技术是普遍的并且家畜圈养相对便宜。

在几十年前，在家畜的乳腺分泌产物中产生免疫原特异性的抗体已经被证实是可行的。最初，最佳结果是在初乳中获得的，即分娩幼崽后的雌性产生的最初的乳液。初乳阶段后，雌性产生的乳在本文被称为成熟乳。初乳是非常特有的产物，其来自乳腺的不同生理和功能状态。在反刍动物中，初乳和成熟乳之间的主要成分差别在于非常高含量的初乳免疫球蛋白，其80％-90％是IgG类。成熟乳中的抗体水平基本上低于初乳中所能达到的水平约1个数量级(Hodgkinson et al.，WO 98/54226；Hastings，美国专利第5,017,372号)。因此，最初大部分临床和临床前研究中使用的乳来源的抗原特异性的抗体实际上是初乳来源的并且主要属于IgG类(Tollemar et al.，Bone Marrow Transpl.23：283-290(1999)；Bostwick et al.，美国专利第5,773,000号；Cordle et al.，美国专利第5,260,057号)。

免疫球蛋白A(IgA)是在粘膜免疫中起关键作用的抗体。在分泌物中发现IgA处于特定形式，被称为S-IgA，其包含通过所谓的J链连接的IgA单体的二聚体，并且还包含分子量约为435kDa的所谓的分泌组分。在IgA的分泌形式中，IgA是粘液分泌物中主要的免疫球蛋白，所述粘液分泌物包括眼泪、唾液、人初乳/成熟乳、胃肠液、阴道液和来自前列腺和呼吸上皮的分泌物。因此，它们可见于来自胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道和口腔/鼻腔的粘膜部位，并且作用于防止病原体定居。分泌型IgA可以经受诸如消化道和呼吸道的恶劣环境，从而提供针对在机体分泌物中繁殖的微生物的保护。这些性质使S-IgA成为在用于改善和/或保持健康，特别是治疗和/或预防诸如胃肠粘膜和呼吸道粘膜以及皮肤粘膜的粘膜表面的感染和/或炎症的产品应用中优选的免疫球蛋白。这些产品的实例包括肠配方，例如婴儿配方、临床营养、功能性食物和保健食品；药物制剂、皮肤制剂和喷雾制剂。因此，投入大量的努力在反刍动物乳中产生增高水平的(分泌型)IgA是不足为奇的。

US 6,974,573讨论了通过粘膜通道或者气道使家畜对于抗原超免疫并且随后将该抗原通过乳腺或者乳腺上淋巴结给予的方法。US 6,974,573讨论了直接使用这样获得的乳或者进一步加工用于纯化抗原特异性(IgA)抗体。

对诸如乳的复合组合物进行过滤分级来生产富含免疫球蛋白的组分在本领域已有描述，但是绝大多数这类现有技术公开内容涉及IgG分离，由于IgG是牛乳分泌产物中的主要免疫球蛋白，所以这也是不足为奇的。US 2004/0167320讨论了使用改进的切向流过滤方法从复合混合物中分离目的分子的方法和装置。根据US 2004/0167320所述，合适的目的分子包括免疫球蛋白。该美国专利申请包括用渗滤从原乳中纯化IgG1的实例，其中详细描述了所述方法的条件和参数。然而，从乳中分离更大的S-IgA免疫球蛋白还未被公开。

US 2003/0059512讨论了分离乳和乳产物的方法和装置，其涉及一个或者多个交叉流过滤步骤。特别是，US 2003/0059512提示将脱脂乳分离为富含酪蛋白的保留物组分和缺少酪蛋白的透过物组分，使所透过物流经随后的交叉流过滤单元，所述交叉流过滤单元适于形成富含诸如白蛋白和免疫球蛋白的大分子的保留物组分，随后例如使用层析法或者交叉流过滤法分离并纯化该保留物组分，从而形成白蛋白和免疫球蛋白。US 2003/0059512没有包括任何关于制备富含IgA的乳组分的具体信息或实施例，更未涉及S-IgA。