[发明专利]用于检测结核杆菌中的异烟肼敏感性的方法和试验片

说明书

技术领域

本发明涉及用于检测结核杆菌中的异烟肼敏感性的方法和试验片。

背景技术

据报道，目前日本每年有数千人、全球每年有数百万人死于结核。结核的治疗基本上采用以化学疗法为中心的内科疗法，在通过内科疗法无法达到治疗目的的情况下考虑外科疗法。

作为内科疗法中使用的结核治疗的药物，已知有异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EB)、吡嗪酰胺(PZA)等多种药物。但是，在对患者给药时，存在着产生耐药菌的问题，所述耐药菌因突然变异而获得了对所给药物的耐性。

有报道称：耐药菌由于特定基因发生突变而获得耐药性。因此，人们开发了通过检测特定基因的突变来检测耐药菌的检测方法。例如，有人公开了结核杆菌诊断试剂盒，该试剂盒中包含固定有寡核苷酸的基板，所述寡核苷酸是根据对结核治疗用药物敏感的野生型结核杆菌和对任一种药物具有耐性的突变型结核杆菌中的结核杆菌基因组上的结核治疗用耐药性关联基因的核苷酸序列合成的(专利文献1)。现在开发的DNA微列阵试剂盒“Oligo Array”(日清纺绩株式会社)是能够检测与对INH、RFP、SM、卡那霉素(KM)和EB这5种药物的耐性有关的基因突变的试剂盒。

异烟肼(INH)是结核治疗中最具代表性的药物。INH耐性菌中的大多数在katG基因或inhA基因中存在突变。人们就检测这些突变的方法进行了各种研究(例如专利文献2和3)。但是，INH耐性菌中约80％根据katG基因或inhA基因的公知的突变而作为耐性菌被检出，而余下的约20％的INH耐性菌则无法检测。因此，对于保有这样的无法检测的INH耐性菌的结核患者也给予INH。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2001-103981号公报

专利文献2：日本专利第3579049号说明书

专利文献3：日本特表平9-501823号公报

非专利文献

非专利文献1：Parish等人，J.Bact.，2007年，189卷，10号，第3721-3728页

非专利文献2：Cohen-Gonsaud等人，J.Mol.Biol.，2002年，320卷，2号，第249-261页

非专利文献3：Marrakchi等人，Microbiology，2002年，148卷(Pt4)，第951-960页

非专利文献4：A.S.Pym等人，Molecular Microbiology，2001年，40卷，第879-889页

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的目的在于：提供用于更准确地检测结核杆菌的INH敏感性、即结核杆菌是否是INH耐性菌的新方法。

解决课题的方法

本发明人等新发现了：fabG1基因也是异烟肼敏感性基因之一，fabG1基因具有突变，由于该突变，结核杆菌可以成为INH耐性菌。

本发明提供检测结核杆菌中的异烟肼敏感性的方法，该方法包括以下步骤：

获得检体中的结核杆菌的fabG1基因的步骤；以及

对该获得的fabG1基因检测与异烟肼耐性有关的突变的步骤。

在一实施方案中，上述突变是指序列表的SEQ ID NO：1记载的核苷酸序列(塩基配列)的609位的碱基(塩基)G突变成A或T的突变、或其互补序列的突变。

本发明还提供用于检测结核杆菌中的异烟肼敏感性的试验片，该试验片上固定有至少一个探针，

该至少1个探针由能够与具有结核杆菌的fabG1基因突变的核苷酸序列的区杂交的寡核苷酸构成，或者由在具有该结核杆菌的fabG1基因突变的核苷酸序列的区中，虽然不能与具有该突变的核苷酸序列的区杂交、但能够与该区所对应的野生型核苷酸序列构成的区杂交的寡核苷酸构成。

在一实施方案中，上述fabG1基因的突变是指序列表的SEQ IDNO：1记载的核苷酸序列的609位的碱基G突变成A或T的突变、或其互补序列的突变。

在另一实施方案中，能够与上述野生型核苷酸序列的区杂交的寡核苷酸由序列表的SEQ ID NO：3记载的核苷酸序列或其互补序列构成。

在一实施方案中，上述试验片上进一步固定有探针，该探针由能够与具有结核杆菌的furA基因突变的核苷酸序列的区杂交的寡核苷酸构成，或者由在具有该结核杆菌的furA基因突变的核苷酸序列的区中，虽然不能与具有该突变的核苷酸序列的区杂交、但能够与该furA基因的区所对应的野生型核苷酸序列构成的区杂交的寡核苷酸构成。