[发明专利]Aβ寡聚物的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及到Aβ寡聚物的测定方法。

背景技术

阿尔茨海默氏病(AD)是一种神经变性疾病，其具有认知能力的进行性缺失、脑中淀粉状蛋白沉淀、神经原纤维变性和神经细胞的缺失等神经病理学特征。

近年来，淀粉样蛋白β(Aβ)肽的寡聚物在神经性疾病(例如，阿尔茨海默氏病、轻微认知障碍MCI(mild cognitive impairment)、唐氏综合征)中的作用备受关注，有文献报道Aβ(1-42)寡聚物是致病性结构基础，其形成是阿尔茨海默氏病的初期病理学事件(Journal of Neurochemistry，2005，95，834-847)。

此外，有文献报道具有相对较高分子量的寡聚物，特别是12聚物对记忆损伤有更大影响(Vol440，Number 7082，2006，p.352-357，nature)。

所以，期待Aβ寡聚物测定方法的开发对于阿尔茨海默氏病的初期诊断和Aβ寡聚物治疗药物的开发有效。

可以通过Western印迹法测定Aβ寡聚物，但是，由于Western印迹法难以分析多个试样，所以希望开发出通过ELISA法测定Aβ寡聚物的方法。

作为通过ELISA法测定Aβ寡聚物的方法例，非专利文献1中公开了使用4G8抗体的夹心EIA法来测定Aβ寡聚物(2～3聚物)的例子。

此外，非专利文献2中公开了使用6E10抗体的夹心EIA法来检测Aβ寡聚物的例子。

此外，非专利文献3中公开了使用2F12抗体或者6E10抗体的夹心EIA法来检测Aβ寡聚物的例子。

此外，非专利文献4中公开了使用2F12抗体的夹心EIA法来检测寡聚物的例子。

此外，非专利文献5中公开了使用2F12抗体的夹心EIA法来检测寡聚物的例子。

专利文献1：国际公开第94/17197号册子

非专利文献1：LeVine等，Analytical Biochemistry，335(2004)p.81-90

非专利文献2：Yang等，The Journal of Biological Chemistry，2005年，Vol.280，No.7，p.5892-5901

非专利文献3：HOWLETT等，Biochem.J.，1999年，340，p.283-289

非专利文献4：WARD等，Biochem.J.，2000年，348，p.137-144

非专利文献5：Howlett等，FEBS Letters，1997年，417，p.249-251

发明内容

发明要解决的问题

尽管如此，有文献报道，Aβ寡聚物中的高分子量寡聚物呈现强毒性，因此希望开发出基于ELISA法测定Aβ寡聚物的方法，特别是选择性测定较高分子量的Aβ寡聚物的方法。

解决问题的方法

本发明者等经过深入研究，结果发现：通过使用识别由序列号：1所示氨基酸序列组成的部分肽的单克隆抗体作为第1抗体，并使用经标记的该第1抗体作为第2抗体，可以检出Aβ寡聚物，特别是可以选择性地测定分子量较高的Aβ寡聚物，并更加深入地研究，完成了本发明。

即，本发明提供了下述内容：

(1)一种Aβ寡聚物的测定方法，其包括下述步骤：

步骤(a)：使可能含有Aβ寡聚物的试样与结合于不溶性载体的、识别由序列号：1所示氨基酸序列组成的部分肽的单克隆抗体(第1抗体)接触，从而使Aβ寡聚物与第1抗体结合的步骤，

步骤(b)：使步骤(a)中结合了第1抗体的Aβ寡聚物与经标记的、识别由序列号：1所示氨基酸序列组成的部分肽的单克隆抗体(第2抗体)反应的步骤。

(2)上述(1)中所述的方法，其中，识别由序列号：1所示氨基酸序列组成的部分肽的单克隆抗体是BAN50a。

(3)上述(1)中所述的方法，其中，Aβ寡聚物为至少9聚物。

(4)上述(1)中所述的方法，其中，Aβ寡聚物为至少12聚物。

(5)上述(1)中所述的方法，其中，经标记的单克隆抗体(第2抗体)是经Fab片段化的(或称为Fab片段)。

(6)上述(1)中所述的方法，其中，Aβ寡聚物是Aβ(1-40)、Aβ(1-42)、Aβ(1-43)、或它们的N末端截短产物、它们的修饰物或者它们的混合物的寡聚物。

(7)一种Aβ寡聚物的测定试剂盒，所述Aβ寡聚物包含：

(a)结合于不溶性载体的单克隆抗体BAN50a(第1抗体)，和