[发明专利]HBV表位反应性外源T细胞受体(TCR)及其用途

说明书

技术领域

本发明主要涉及用于治疗乙型肝炎病毒(HBV)和HBV相关的疾病(如肝硬化和肝细胞性肝癌(HCC))的免疫介导疗法的领域，并且涉及制定这些疗法的方法。具体而言，所述免疫介导疗法可为表达至少一种HBV表位反应性外源T细胞受体的细胞和/或编码HBV表位反应性T细胞受体的多核苷酸、载体和/或多肽的形式。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)感染类人动物总科(包括人)的肝脏，并且引起称作肝炎的炎症。它是一种DNA病毒并且是引起病毒性肝炎的多种独立病毒中的一种。HBV目前感染全世界至少3.5亿人。75％的慢性感染HBV的患者生活在亚洲，但是病毒已在世界范围内扩散。例如，在美国，大约150万美国人或者约0.5％的人口携带HBV。在特定高危人群中，像与其他男人发生性行为的男人、肾透折患者以及患有血友病的人，感染尤其更加常见。慢性HBV感染影响了10～15％的第一代亚裔美国人，并且大约5％的从俄罗斯、亚洲和东欧收养的儿童有慢性HBV感染。慢性HBV感染可最终导致肝硬化和肝细胞性肝癌(HCC)，而HCC是一种对目前的化学疗法反应非常差的致命疾病。

由于现有的药物抑制而非消除HBV，因此，目前对这种全球性大储源的慢性感染者的可用治疗方法正在受到挑战。虽然大多数HBV感染患者对目前可用的治疗方法有反应，表现为肝组织学和血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平的改善，但是当停止治疗时，几乎所有患者都复发。此外，治疗HBV的更常见的方法包括使用如拉米夫定和阿德福韦的药物。然而，这些药物导致患者体内的抗病毒抗药性的形成，每年大约20％的用拉米夫定治疗的患者和大约3％的用阿德福韦治疗的患者出现这种情况。最后，大部分患者会形成抗药性，此时，抗病毒药将几乎没有作用。

因此对有效的抗病毒治疗方法存在着全球性的需求，该方法引起HBV特异性免疫应答从而有效地并成功地消除患者体内的共价闭环形式的HBV。在一些受试对象中发现的天然产生的HBV表位特异性T细胞使该受试对象能够天生具有对HBV感染的有效控制。过去的研究已显示，持续/慢性HBV感染患者的HBV表位特异性T细胞缺失或功能改变。因此，随着人们对在HBV感染期间病毒与宿主相互作用的认识的增加，这些认识促使人们推测对在慢性感染患者体内存在的缺陷性抗病毒免疫力的治疗性重建可能使疾病症状消退。这种观念的正确性在进行骨髓移植并接受了对HBV具有天然免疫力的捐献者的骨髓的慢性HBV感染患者中得到了直接证实。注入健康的HBV致敏的免疫系统导致这些患者体内的慢性HBV感染症状消退。然而，对HBV慢性感染患者来说，骨髓移植显然不是一种容易的治疗选择，而在慢性乙型肝炎患者体内使用多种疫苗来增强HBV特异性免疫力的尝试已经是令人失望的。

治疗性疫苗策略失败的可能原因是这样的事实，即HBV慢性携带者的免疫系统不具有与健康的非HBV感染者相同的效率和特异性谱(repertoire of specificities)。

此外，慢性HBV感染患者体内的病毒抗原的持续大量产生会删除或耐受抗原特异性T细胞。因此慢性HBV感染患者的特征为HBV特异性CD4+和CD8+T细胞应答低下或缺失。而且，有人已推测，由HBV感染产生的T细胞抗体抗原亲和力低和细胞因子谱(cytokine profile)无效可能促进了慢性HBV感染的发展而不是有利于病毒的清除。

显然，为了减少全世界的HBV感染和HBV相关的恶性肿瘤的发病率和死亡率，需要以HBV感染患者的细胞因子谱涉及的分子为靶向的更加有效的疗法。

发明内容

本发明致力于解决上述问题，并且具体而言，采用外源T细胞受体(TCR)转移通过重定向慢性HBV感染患者的淋巴细胞的特异性而提供了一种有效且高效的治疗HBV感染的新方法。

根据第一个实施方式，本发明提供了至少一种分离细胞，其包含至少一种HBV表位反应性外源T细胞受体(TCR)和/或其片段。

具体而言，所述HBV表位可以为HLA-A2限制性的。更具体而言，所述HBV表位可以包含至少一种乙型肝炎核心抗原或一种乙型肝炎包膜抗原或者它们的突变体。甚至更具体而言，所述HBV表位可以包含HBc18-27、HBs370-79和/或它们的突变体。所述HBc18-27表位可以包含选自SEQ IDNO：25～39中的至少一种序列。具体而言，所述HBc18-27表位可以包含序列SEQ ID NO：25。所述HBs370-79表位可以包含选自SEQ ID NO：56～58中的至少一种序列。具体而言，所述HBs370-79表位可以包含序列SEQ IDNO：56。