[发明专利]基于肿瘤抑制因子的过度增生细胞对溶瘤病毒疗法的敏感性

说明书

发明背景

本申请要求享有于2008年5月22日提交的美国临时专利申请号61/055,360的优先权，其全部内容在此引入作为参考。

技术领域

本发明主要涉及病毒学，分子生物学和医学领域。更特别地，它涉及测定过度增生紊乱包括癌症对于溶瘤病毒疗法的敏感性。

背景技术

呼肠孤病毒(呼吸道肠道孤儿病毒)是一种普遍存在的无包膜病毒，包含作为其基因组的10条双链RNA片段，它对人类的感染通常是温和的，局限于上呼吸道和胃肠道并且通常在有免疫功能的宿主中是无症状的(Tyler，2001)。关于逆转改造呼肠孤病毒的尝试大部分是失败的，这归因于多个因素，包括呼肠孤病毒的双链RNA基因组。已知缺失σ1的呼肠孤病毒颗粒是无传染性的(Larson et al，1994)。

重要的是，很多年来呼肠孤病毒被公认为当它感染特定类型的转化细胞时可呈现显著的杀细胞能力(Duncan et al，1978；Hashiro et al，1977)。有复制能力的溶瘤病毒提供了引人注目的抗癌疗法。这些溶瘤病毒有两个主要优点。第一，与传统的化学疗法和放射疗法不同，由于它们在正常细胞中的复制能力有限所以它们能特异性锚定癌细胞。第二，与无复制能力的载体相比，它们能从最初感染的癌细胞蔓延到周围的癌细胞，从而达到大量分布以及有效地抗癌的效果。

虽然暴露于野生型的呼肠孤病毒对于健康的个体而言通常是无症状的，但是对于免疫缺损的个体而言仍会存在很大潜在的非常严重的风险，这就限制了呼肠孤病毒疗法对病人的临床应用潜能，如对于可能从这一疗法中获益的癌症病人。直至在体外和体内发现包含致癌的Ras信号通路的转化细胞对感染呼肠孤病毒(3型Dearing株)尤其敏感(Coffey et al，1998；Strong et al，1998；Norman et al，2004)之前，呼肠孤病毒溶瘤能力的基本原理仍然是未知的。由于在各种人类癌症中通常能观察到Ras基因突变(Duursma et al，2003)，这些发现导致当前呼肠孤病毒疗法在临床试验中的使用(Norman et al，2005)。

然而，Ras基因突变的存在可能只是癌细胞对呼肠孤病毒疗法敏感性的部分原因。最近研究显示Ras通路并不是决定允许呼肠孤病毒的唯一因素(Song et al，2009)，并且还显示从转化Ras的细胞可以建立抗呼肠孤病毒的细胞(Kim et al，2007)而仍保留活化的Ras突变。因此，需要有改进的方法来鉴别和筛选合适的癌细胞子群体用于呼肠孤病毒疗法和其他溶瘤病毒试剂。

发明内容

发明概述

当含有特定缺损的或失活的肿瘤抑制基因如p53、Rb、ATM、BRCA1、BRCA2、MutS、MutL、MutH、APC和ATBF1的过度增生或转化的癌细胞在体外或体内暴露于呼肠孤病毒时，该病毒不论是以野生型(3型Dearing)还是改良型形式(例如：σ1蛋白合成缺损的不完全减弱病毒)存在，对杀伤这些癌细胞均有效。因此，呼肠孤病毒的应用范围可以扩展至与ras原癌基因信号通路异常或活性过剩相关的案例。先前被认为主要应答ras、干扰素或其他细胞免疫信号通路状态的其他病毒对肿瘤抑制因子功能的缺失也是敏感的，它们的应用范围也同样可以扩展。

因此，依据本发明，提供了一种确定过度增生紊乱对呼肠孤病毒或粘液瘤病毒的溶瘤作用是否敏感的方法，包括(a)提供一种过度增生细胞；(b)测定由过度增生细胞获得的p53、Rb、ATM、BRCA1、BRCA2、MutS、MutL、MutH、APC和/或ATBF1基因或基因产物的结构、功能或表达；以及(c)比较过度增生细胞的与野生型的p53、Rb、ATM、BRCA1、BRCA2、MutS、MutL、MutH、APC和/或ATBF1基因或基因产物的结构、功能或表达，其中过度增生细胞的p53、Rb、ATM、BRCA1、BRCA2、MutS、MutL、MutH、APC和/或ATBF1在结构、功能或表达上的缺陷表明过度增生紊乱对呼肠孤病毒或粘液瘤病毒的溶瘤作用是敏感的。