[发明专利]生物活性剂的囊封方法

说明书

背景技术

很多药物在大脑或眼中的靶标处具有活性，为了使这些药物到达它们的靶标，它们必须穿过生物屏障，如血脑屏障。虽然一些分子能够通过生物屏障，但是还有一些不能有效或事实上根本不能穿过这些屏障的其它分子。许多药物也仅仅当直接进入靶标组织时才有效，且如果不能到达这个靶标组织，药物实际上也不能起作用。因此，由于不能穿过这样的生物屏障，很多可能有效的药物不能在临床上使用。

现有技术中已记述了很多方法以增强药物穿透这些生物屏障的能力。

一种方法是改变屏障本身的功能。例如，渗透剂或拟胆碱药物槟榔碱类(cholinomimetic arecolines)，其能打开血脑屏障或者改变血脑屏障的穿透性(Saija A等人，J Pharm.Pha.42：135-138(1990))。

其它的方法是修饰药物分子本身。例如，修饰蛋白以试图穿过血脑屏障，包括使这些蛋白糖基化或者形成前药(WO/2006/029845)。

还有另一方法是植入可控制释放的聚合物，其从基质系统直接将活性成分释放进入神经组织。然而，如果直接植入大脑或骨髓，这种方法是浸入性的且需要外科手术介入(sable等人，美国专利4,833,666)，这存在的问题是需要病人的同意，且通常仅仅是在大脑内随给予的药物一起进行定位输送，通常很快被排出(WO/2006/029845)。

为了克服这些局限，人们使用了药物载体系统，然而，靶标的药物传输的主要问题是通过网状内皮系统(RES)尤其是通过肝和脾的巨噬细胞的注射的载体的快速调理(opsonisation)和摄取。

因此，仍然需要一种有效的方法，以将大分子(如蛋白质)输送到大脑和眼中。具体而言，需要找到一种将大分子穿过血脑屏障的方法，所述大分子在进入大脑时仍能保留活性，以及还能提供所需要的释放动力学，保持蛋白质的稳定和活性，且能够回避清除机制。

附图说明

图1所示为通过动态光散射(DLS)获得的粒度数据，表明悬液中纳米粒子的存在。

图1(a)所示为通过动态光散射对纳米粒子悬液分析之后获得的相关图。

图1(b)所示为纳米粒子的多模态粒度分布(导出数据)，绘图以说明相对于粒度范围的粒子群(数量)的分布。

图1(c)所示为所示为纳米粒子的多模态粒度分布(导出数据)，绘图以说明相对于粒度范围的粒子群(数量)的分布。

图1(d)所示为所示为纳米粒子的多模态粒度分布(导出数据)，绘图以说明相对于粒度范围的粒子群(数量)的分布。

图2所示为用HIP方法获得的囊封的亮啡肽类似物(Dalargin)的量与通过普通方法在粒子表面吸收得到的量的对比。

图3所示为在输送HIP-PBCA纳米粒子之后脑中的亮啡肽类似物水平。仅当使用HIP方法在微粒中囊封时所述肽是可测量的。

图4所示为使用HIP方法在PBCA纳米粒子中对亮啡肽类似物的囊封。测定水相的pH对囊封效率的影响。

图5所示为使用HIP方法在PBCA纳米粒子中对抗鸡蛋溶菌酶结构域抗体的囊封。通过Edman测序分析纳米粒子。

图6所示通过SDS-PAGE分析以确认在HIP-PBCA纳米粒子中的dAb壳体化。将纳米粒子离心分离以除去任何游离的dAb并用SDS-PAGE分析颗粒以观察壳体化的dAb。

图7所示为通过SDS-PAGE分析以确认VEGA dAb(DOM15-26-593)载入HIP-PBCA纳米粒子。将纳米粒子制剂与dAb标准进行比较，以便确定在纳米粒子中存在的dAb的量。起始输入的12mg中总计3.31mg dAb已经在纳米粒子中壳体化。因此，载入效率为27.6％。dAb载入率为3.31％w/w。

图8所示为小鼠中含有域抗体的HIP PBCA纳米粒子通过静脉途径将它们载入的蛋白输送到脑中的能力的体内评估结果。在给药后10分钟，纳米粒子中的dAb形成可检测的脑吸收物，其量为8.0ng/ml。游离的dAb在脑中也可以检测到，其浓度较低，为3.3ng/ml(初始数据)。因此，纳米粒子似乎少量增加蛋白的脑吸收(初始数据)。在60分钟时，观察到相反的现象，因为游离的dAb似乎聚集在脑中，导致其脑水平进一步增加到13.5ng/ml。校正了脑水平。

图9所示为通过静脉途径从含有域抗体的HIP PBCA纳米粒子的体内评估中得到的dAb在脑和血液中的比例。结果显示，当和纳米粒子一起给予与给予在溶液中的游离dAb相比时，脑中存在的dAb比血液中存在的dAb的比例高。