[发明专利]用于抑制TGF-β受体基因表达的组合物和方法

说明书

本发明涉及双链核糖核酸(dsRNAs)及其介导DNA干扰以抑制TGF-β受体基因表达的用途，特别是抑制I型TGF-β受体表达的用途。此外，所述dsRNA用于治疗纤维化性疾病/病症、炎症和增殖性疾病(例如癌症)的用途也是本发明的一部分。 

转化生长因子-β(TGF-β；AfCS ID A002271)是细胞因子的TGF-β超家族的一部分，其具有超过40个成员。TGF-β本身具有至少三种同种型，包括TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3。每种是同源二聚体，虽然在TGF-β同种型和TGF-β超家族的其它成员之间也可形成异源二聚体。TGF-β由很多细胞类型分泌，包括与两种其它多肽(潜在TGF-β结合蛋白(LTBP)和潜在相关肽(LAP))复合的潜在形式的巨噬细胞。血清蛋白酶，例如纤溶酶，催化活性TGF-β从复合体中释放。这通常发生于巨噬细胞表面，其中潜在TGF-β复合体通过其配体(血小板反应蛋白-1(TSP-1))与CD36结合。活化巨噬细胞的炎性刺激通过促进纤溶酶的活化，增强了活性TGF-β的释放。巨噬细胞还可内吞浆细胞分泌的结合IgG的潜在TGF-β复合体，由此将活性TGF-β释放进细胞外液体中。 

I型和II型TGF-β受体(AfCS ID A002272/A002273)均涉及对TGF-β的信号应答。两种均为具有胞质丝氨酸-苏氨酸激酶结构域的I型整合膜蛋白。II型受体在不存在配体时形成同源二聚体，并且可互相自身磷酸化。II型受体可独立于I型受体结合TGF-β，它们是配体特异性的主要决定子。I型受体也可无需配体形成同源二聚体，但是在不存在II型受体时它们不能与配体高效结合。存在配体时，I型和II型受体形成高亲合性(avidity)受体复合体。然后II型受体磷酸化I型受体，致使它们活化。 

除了对Smad转录因子的直接活化(下文详述)之外，还有一些证据表 明，TGF-β受体可通过Ras、RhoA和TGF-β活化激酶(TAK)来活化ERK、JNK和p38MAP激酶。其它报道表明，TGF-β受体可通过PI 3-激酶和蛋白磷酸酶2A产生信号。TGF-β受体活化非Smad信号途径的机制尚不清楚。 

基本上，TGF-β受体通过被称为Smads的潜在胞质转录因子传递信号。术语Smad源于同源果蝇(Drosophila)Mad蛋白(“mothers againstdecapentaplegic”的缩写)和秀丽隐杆线虫(C.elegans)Sma蛋白(“small”的缩写)的名称。结合配体后，磷酸化的I型TGF-β受体结合被受体调节的Smads(R-Smads)——Smad1、2、3、5和8，并对它们磷酸化。R-Smads和TGF-β受体复合体的结合由被称为SARA的含FYVE结构域的适体蛋白协助，并且可在受体已经内化进内体之后发生。一旦被磷酸化，R-Smads从受体复合体上解离，形成同源三聚体并且与Smad4(共同介体Smad(Co-Smad))结合。R-Smad/Smad4复合体转位进细胞核，并且通过与组织特异性转录辅激活物或辅阻遏物相互作用来调控基因转录。Smad4和R-Smads的Mad同源性1(MH1)结构域结合5′-AGACC-3′Smad结合元件(SBE)。 

TGF-β受体信号转导受Smad7抑制性Smad(I-Smad)的负调控。Smad7和Smurf2E3连接酶的复合体与SARA竞争结合TGF-β受体，并促进TGF-β受体复合体的泛素化和降解。Ras/ERK途径还削弱TGF-β向细胞核的信号转导。ERK对R-Smads的磷酸化阻止了它们的核积累。 

TGF-β有广泛的生物活性，因其太多在此不予赘述。虽然其抑制了很多细胞类型的生长，但是其也可诱导细胞增殖和活化。近来已表明，对TGF-β受体信号转导的抑制可阻止大鼠颈动脉损伤模型中狭窄(stenosis)的形成(Fu et al.，Arteriosclerosis，Thrombosis，and Vascular Biology 2008，28：665)。此外，II型TGF-β受体的增加的表达看起来在糖尿病性大血管病的发展中具有重要作用(Hosomi et al.，Atherosclerosis.2002，162：69-76)。TGF-β已被一般性地涉及纤维化性组织的形成中，对TGF-β与TGF-β受体的结合的抑制已显示能减轻纤维化(Yata et al，Hepatology 2003， 35：1022-1030)。