[发明专利]基于微泡的组合物和方法

说明书

本申请要求递交于2008年6月20日的序列号为61/074218的美国临时申请的优先权，通过援引将其并入本文。

技术领域

本发明的领域是对微泡中的RNA的检测和/或分析及其在诊断、预后和/或对疾病和其他病症的研究中的应用。

背景技术

在历史上曾认为微泡(microvesicle)是无明显功能的细胞碎片。然而，越来越多的实验数据已指出微泡具有多种生物活性。举例而言，已据显示，源自血小板的微泡通过在微泡上的表面蛋白刺激选定的细胞(例如，Thromb.Haemost.(1999)，82：794，或J.Biol.Chem.(1999)，274：7545)。在其他实例中，报导了血小板微泡中的生物活性脂类对某些靶细胞的特异效应(例如，J.Biol.Chem.(2001)，276：19672；或Cardiovasc.Res.2001)，49(5)：88)。在另外的实例中，通过将某种微泡表面组分转移至动员的CD34+内皮细胞，血小板微泡提高了所述动员的细胞的粘附(例如，Blood(2001)，89：3143)。

最近已据显示，微泡包含如下的RNA：所述RNA至少部分地看似反映其所源自的细胞的RNA含量。另据显示，微泡对其他细胞具有显著的生物学效应，这大概归因于存在于所述微泡中的RNA；在本发明的共同所有的国际专利申请(WO2005/121369)中描述了此类微泡的各种实例和方面，所述国际专利申请明确地构成本申请的一部分。

在其它已知的报导中，描述了包括非编码miRNA(微小RNA)的微泡，所述miRNA能潜在地干扰或调控在融合有所述微泡的细胞中的基因表达(PLoSNovember 2008，Vol.3(11)，e3694)。其他报导讨论了经由外来体RNA的细胞至细胞的体外信号传导(Cell Adh Migr 1：3，156-158；2007；Cancer Immunol Immunother 2006Jul；55(7)：808-18；Blood.2007Oct 1；110(7)：2440-8.)。还显示出，虽然在接受者细胞内一些外来体RNA是功能性的并且是可翻译的，但是在外来体中存在的很多这些RNA分子并不存在于据信所述外来体的所源自的细胞的细胞质中(Nat Cell Biol.2007Jun；9(6)：654-9)。美国专利第6916634号教导，虽然在血清中RNA通常是不稳定的并易被RNA酶水解，但其他RNA大概因其与循环颗粒的不同结合而抵抗RNA酶的攻击。引人注目的是，所述第6916634号专利详细描述了结合了RNA的颗粒在化学上和结构上高度多样化的性质(大概因为其多样化的来源和产生方式)，并由此推断血清RNA最好以不加区分的方式进行分离。因此，即使最近已报导了膜结合RNA或囊泡化RNA(vesiculated RNA)，关于微泡的性质、品质、可用性和来源/产生方式仍存在大批的对立的数据和假设。

所以，在本领域中尚未充分认识到含RNA的微泡的巨大诊断潜力，而且仍然需要基于微泡的诊断性组合物及方法，其中将来自微泡的RNA富集并区分，从而获得表明所述微泡所源自的组织或器官的病症的结果。

发明内容

根据本发明主题，在不同的诊断性、预后性和/或分析性组合物及方法中采用微泡，其中，利用微泡的特定RNA内容物、并且可选地利用所述微泡的至少另外一种附加的含信息组分来获得细胞特异性、组织特异性、器官特异性、和/或疾病特异性信息。

在本发明主题的一个特别优选的方面中，提供了哺乳动物生物样品(例如，血浆或血清)的分析方法，其中从活的供体哺乳动物(优选为人)获得包括多种独特RNA分子的微泡。随后将所述微泡富集并区分，从而产生基于一种或多种独特RNA分子的一级结果、基于至少两种独特RNA分子的二级结果和/或基于次分离的(sub-segregated)代理体(proxysome)及一种或多种独特RNA分子的三级结果。当然，应意识到的是，在区分中的RNA分析可包括对单一RNA、对至少两种独特RNA、以及在某些方面中甚至对整个RNA谱(通常通过对多个独特DNA或RNA的阵列的分析获得)的分析。随后将由此获得的结果与对哺乳动物病症的诊断(例如，癌症或者癌症的临床阶段，包括癌前期阶段)或预后/诊断相关联。