[发明专利]生产己二酰基-7-ADCA的菌株

权利要求书

1.用于鉴定能够生产N-己二酰化的β-内酰胺化合物的微生物菌株的一个或多个下述基因的方法，所述基因编码涉及己二酸盐降解和/或脂肪酸β-氧化的一种或多种酶，所述方法包括以下步骤：

a.选择涉及己二酸盐降解和/或脂肪酸β-氧化的一个或多个已知基因的核苷酸序列和/或任选地由所述基因编码的一种或多种已知酶的氨基酸序列；

b.使用从步骤(a)中选择的序列作为BLAST搜索中的探针，用于在能够生产N-己二酰化的β-内酰胺化合物的微生物菌株的可获得的核苷酸或氨基酸序列中鉴定同源序列。

2.根据权利要求1的方法，其中所述涉及脂肪酸β-氧化的酶选自下述组：

a.第I组：CoA连接酶(EC 6.2.1.xx)

b.第II组：酰基-CoA脱氢酶(EC 1.3.99.xx)和酰基-CoA氧化酶(EC 1.3.3.xx)

c.第III组：烯酰-CoA水合酶(EC 4.2.1.17)

d.第IV组：3-羟基酰基-CoA脱氢酶(EC 1.1.1.35)

e.第V组：乙酰基-CoA C-酰基转移酶(硫解酶-EC 2.3.1.16)。

3.根据前述权利要求中任一项的方法，其中编码涉及将来自培养基的己二酸并入N-己二酰化的β-内酰胺化合物的一种或多种酶的基因具有大于1的“己二酸盐/对照”比，其中所述“己二酸盐/对照”比是亲本菌株在含有己二酸的培养基中培养时所述基因的转录本水平与亲本菌株在不含己二酸的对照培养基中培养时所述基因的转录本水平的比例。

4.在包含己二酸的培养基中培养时能够生产N-己二酰基化的β-内酰胺化合物的突变体微生物菌株，其特征是所述菌株与非突变体亲本菌株相比，具有经改进的由来自培养基的己二酸向N-己二酰化的β-内酰胺化合物的并入产率。

5.根据权利要求4的菌株，其特征是所述经改进的己二酸盐并入产率为至少5％。

6.前述权利要求中任一项的菌株，其中编码涉及己二酸降解并且可通过权利要求1-3中任一项的方法鉴定的基因是功能性失活的。

7.前述权利要求中任一项的菌株，其中所述涉及己二酸降解的酶选自由以下组成的组：CoA连接酶(EC 6.2.1.xx)，酰基-CoA脱氢酶(EC 1.3.99.xx)和酰基-CoA氧化酶(EC 1.3.3.xx)，烯酰基-CoA水合酶(EC 4.2.1.17)，3-羟基酰基-CoA脱氢酶(EC 1.1.1.35)，乙酰基-CoA C-酰基转移酶(硫解酶-EC 2.3.1.16)。