[发明专利]抗体纯化工艺

权利要求书

1.从样本中纯化蛋白质产品的工艺，所述样本包含所述蛋白质产品和所述蛋白质产品的聚集物，所述工艺包括：

(a)第一层析步骤，包括使用非离子聚合物去除所述蛋白质产品的所述聚集物，其中所述非离子聚合物的浓度足以在所述层析条件下强化从所述蛋白质产品的聚集物分离所述蛋白质产品，由此在本步骤之后收集含有所述蛋白质产品基本不含聚集物的组分；

(b)合并步骤，将强化溶解性的添加剂与从所述第一层析步骤获得的含有所述蛋白质产品的组分相合并，或者与随后获得的含有所述蛋白质产品的组分相合并，该随后获得的组分来自所述从所述第一层析步骤获得的含有所述蛋白质产品的组分，其中所述强化溶解性的添加剂从由两性离子、尿素化合物和亚烷基二醇组成的群中选取；以及

(c)第二层析步骤，包括使用离子交换层析，其中所述强化溶解性的添加剂的浓度足以强化所述蛋白质产品的溶解性并且基本上避免在所述层析条件下发生闭塞，且其中所述强化溶解性的添加剂不干扰所述第二层析步骤，并且其中所述工艺产生基本不含聚集物的纯化蛋白质产品。

2.如权利要求1所述的工艺，其中所述样本为细胞培养上清液。

3.如权利要求1所述的工艺，其中所述蛋白质产品为免疫球蛋白或其片段。

4.如权利要求3所述的工艺，其中所述免疫球蛋白为IgM。

5.如权利要求1所述的工艺，其中所述强化溶解的添加剂从由甘氨酸、甜菜碱、尿素、乙二醇和聚乙二醇组成的群中选取。

6.如权利要求1所述的工艺，其中所述第一层析步骤的所述非离子聚合物为聚乙二醇(PEG)。

7.如权利要求1所述的工艺，其中所述第一层析步骤包括羟磷灰石层析，其中所述非离子聚合物的浓度足以在羟磷灰石层析条件下强化从所述聚集物中分离所述蛋白质产品。

8.如权利要求7所述的工艺，其中所述非离子聚合物为聚乙二醇且所述强化溶解的添加剂从由甘氨酸和尿素组成的群中选取。

9.如权利要求8所述的工艺，其中在所述羟磷灰石层析后收集的所述组分被收集到含有所述强化溶解的添加剂的混合物中。

10.如权利要求1所述的工艺，其中对在所述第一层析步骤后收集的所述含有所述蛋白质产品的组分进行进一步的分离或纯化步骤，从而产生含有所述蛋白质产品的组分，所述蛋白质产品来自从所述第一层析获得的组分，所述进一步的分离或纯化步骤在将该组分与所述强化溶解的添加剂合并的步骤之前。

11.如权利要求1所述的工艺，其中所述第二层析步骤包括阴离子交换层析。

12.如权利要求1所述的工艺，其中所述第二层析步骤包括阳离子交换层析。

13.如权利要求11所述的工艺，其中所述第二层析步骤进一步包括阳离子交换层析。

14.如权利要求1所述的工艺，其中从所述第一层析步骤获得的含有所述蛋白质产品的所述组分与含有所述强化溶解的添加剂相合并。

15.如权利要求14所述的工艺，其中所述强化溶解的添加剂为两性离子。

16.权利要求1所述的工艺包括第三层析步骤，包括对从所述第二层析步骤获得的组分执行离子交换层析。

17.如权利要求16所述的工艺，其中所述第二层析步骤为阴离子交换层析，所述第三层析步骤为阳离子交换层析。

18.如权利要求16所述的工艺，其中所述第二层析步骤为阳离子交换层析，所述第三层析步骤为阴离子交换层析。

19.如权利要求1所述的工艺，其中所述强化溶解的添加剂为甘氨酸。

20.如权利要求4所述的工艺，其中所述第一层析步骤包括羟磷灰石层析，其中所述非离子聚合物的浓度足以在羟磷灰石层析条件下强化从所述IgM聚集物中分离IgM。

21.如权利要求20所述的工艺，其中所述非离子聚合物为聚乙二醇。

22.如权利要求21所述的工艺，其中所述非离子聚合物为浓度约10％的聚乙二醇。

23.如权利要求20所述的工艺，其中所述非离子聚合物为聚乙二醇，所述强化溶解的添加剂从由两性离子和尿素组成的群中选出。