[发明专利]热稳定的乳铁蛋白水性组合物及其制备和用途

说明书

发明领域

本发明涉及加热乳铁蛋白而不损失其生理活性并延长其在液体制剂中的贮存期的方法。更具体而言，本发明涉及在超过60℃的温度的酸性条件下加热乳铁蛋白的方法。本发明还涉及由此处理的乳铁蛋白的用途。

发明背景

已知乳铁蛋白为分布于泪液、唾液、外周血、乳汁等中的铁结合蛋白。已知乳铁蛋白具有各种生理活性，例如对于有害细菌的抗细菌活性、促进肠中铁吸收的活性、抗炎活性等。US-A-2007/161541中给出了乳铁蛋白用途的综述，通过引用的方式将其内容并入本文。

因此，向食品、加工的食品、药物、美容用品等添加乳铁蛋白或作为补充剂直接摄取是有益的。这些产品通常需要加热处理，例如巴氏杀菌或灭菌，从而使其成为微生物学安全的并可长期稳定贮存。

然而，如果不采取措施，乳铁蛋白会表现出对加热不稳定并且乳铁蛋白的热处理可以导致生理pH下乳铁蛋白的变性。本领域中已有报道，62.5℃加热30分钟使乳铁蛋白几乎丢失生理活性，并且70℃加热15分钟发生完全变性。

由上文可以清楚地看出，在乳铁蛋白作为需要利用其生理活性的成分时，不可以对其施加充分的热处理。乳铁蛋白的液体制剂或储液必须经过灭菌以获得长的贮存期(使用前数周或数月)。

EP 454.084和EP 1.040.766均教导了富含铁的乳铁蛋白饮料。具有贫血趋向(anemic drift)的人、孕妇或哺乳母亲需要铁强化。

虽然EP’084和EP’766中没有明确地提及，但是本领域技术人员应当立即意识到铁饱和对于目的乳铁蛋白恢复的影响。根据Brisson et al.“Effect of iron saturation on the recovery of lactoferrin in rennet whey coming from heat-treated skim milk”J.Dairy Sci.90：2655-2664，乳铁蛋白与铁复合，这种复合作用改善乳铁蛋白的热稳定性。然而，在营养学领域中使用铁常常是不希望的，例如从味觉的角度考虑。此外，虽然铁复合作用能够增加乳铁蛋白的稳定性，但是随着时间仍然会发生变性。因此，需要另外的和改进的方法以实现热稳定。

GB 2,361,703教导了通过与乳铁蛋白复合而使维生素B12和/或叶酸稳定，由此延长叶酸和维生素B12的贮存期，否则它们在氧的存在下会表现出低的热稳定性和贮存稳定性。使用了来自任何来源的乳铁蛋白，包括铁稳定的乳铁蛋白。但是，如果从不同角度考虑，即寻找稳定乳铁蛋白的方法的角度，将乳铁蛋白与叶酸和维生素B12结合的溶液用于食品不是理想的方法。这些化合物比较昂贵，干扰所有与其相关的代谢途径，将这些化合物给予人群并不是无限制性的。

为了解决其热稳定性，Morinaga Milk Industry名下的EP-A-437.958中提示，在1.0-6.5的pH下将乳铁蛋白在超过60℃的温度下加热。从该文的表1所列的液相色谱结果可以得出，在酸性条件下，在60℃下加热5分钟时乳铁蛋白是稳定的。该表1还显示，当将温度上升至70、80、90或甚至100℃时，成功的窗口显著变窄。在100℃以上时，所有乳铁蛋白都变性。所有测量均是在热处理后短时间内进行的。EP-A-437.958未提及乳铁蛋白随时间的稳定性和贮存温度。EP-A-437.958的内容通过引用的方式并入本文。

在尝试再现EP-A-437.958所报道的结果的过程中，本发明人发现HPLC(高效液相色谱)实际上不适于测定变性的程度。本发明人发现了更好的技术包括FPLC(快速液相色谱)和/或ELISA，并且发现HPLC容易过高估计“未变性”的程度。因此，EP-A-437.958的表1中的结果实际上并没有所宣称的那么好。此外还发现，即使能获得EP-A-437.958中的热稳定的乳铁蛋白，它也是短暂持续的。在的贮存期内，在一定温度下，仍然会在几周内发生变性。EP-A-437.958本身未提及热处理对于贮存期的影响。此外，当延长加热时间时，Morinaga所主张的方法的有限的成功显著下降。实际上，所述专利本身也承认了这一点。这段中的观察可见于本发明附加的比较实施例中。最后，本发明人观察到，EP-A-437.958的方法所产生的含乳铁蛋白的水性组合物仅在保持为7℃或更低时是较长时间稳定的，从而就必然需要冷却系统。