[发明专利]获得基于RNA干扰(RNAi)对植物病原体攻击有抗性的转基因植物的方法

权利要求书

1.用于制备通过RNA干扰对一种或多种植物病原体的攻击有抗性的转基因植物的方法，其包括下列步骤：

a)分离编码G蛋白偶联受体(GPCR)或其部分的cDNA核苷酸序列，所述受体的功能对于所述植物病原体是至关重要的；

b)构建表达载体，所述表达载体包含由两个特异性重组位点侧翼连接的通过步骤a)确定的编码GPCR或其部分的cDNA核苷酸序列；

c)使步骤b)的表达载体与二元载体进行重组反应，获得重组质粒，所述二元载体包含组成型或组织特异性启动子、相同的特异性重组位点和内含子序列；

d)将所述重组质粒转移至根癌土壤杆菌的感受态细胞内和转化植物；

e)培养植物并且在所述植物中获得dsRNA的组成型或组织特异性表达。

2.权利要求1的方法，其中所述植物病原体选自食草昆虫、线虫和真菌。

3.权利要求2的方法，其中所述食草昆虫选自海灰翅夜蛾(Spodoptera littoralis)、烟芽夜蛾(Heliotis virescens)。

4.权利要求2的方法，其中所述线虫选自南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、北根结线虫(Meloidogyne hapla)、马铃薯金线虫(Globodera rostochiensis)。

5.权利要求1至4中任一项的方法，其中当dsRNA表达是组织特异性的时，所述组织选自叶面、根系、树干、蓓蕾、花、果实。

6.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述GPCR受体选自咽侧体抑制素A或C、章鱼胺/酪胺、PBAN肽、利尿激素、脂肪动员激素、神经肽、多巴胺、血清素或视紫质样的受体。

7.权利要求6的方法，其中当所述昆虫是海灰翅夜蛾时，编码GPCR受体或其部分的cDNA核苷酸序列选自AlstAR(SEQ ID NO：1)、AlstCR(SEQ ID NO：2)、DHR(SEQ ID NO：3)、AKHR(SEQ ID NO：4)、LGR1(SEQ ID NO：5)、Oct/TyrR(SEQ ID NO：6)、OR83b(SEQ ID NO：7)和PBAN-R(SEQ ID NO：8)。

8.权利要求6的方法，其中当所述线虫是南方根结线虫时，编码GPCR受体的cDNA核苷酸序列选自血清素样受体(SEQ ID NO：9)、多巴胺样受体(SEQ ID NO：10)、神经肽受体(SEQ ID NO：11)、视紫质样受体。

9.根据前述权利要求中任一项的方法，其中可在每一个步骤中使用编码对于不同植物病原体而言至关重要的GPCR受体的cDNA核苷酸序列平行地重复步骤a)-c)以获得一个或多个重组质粒，所述重组质粒d)用于共转化相同的植物或d1)转化不同的植物并且将其杂交。

10.前述权利要求中任一项的方法，其中所述植物属于茄科(Solanaceae)，优选烟草。

11.根据权利要求1至10中定义的方法可获得的抗一种或多种植物病原体的转基因植物。

12.权利要求10的转基因植物，当从属于权利要求7时，其为抗海灰翅夜蛾的烟草植物。

13.抗海灰翅夜蛾的转基因植物，其特征在于其是烟草植物并且表达dsRNA，在所述dsRNA中，反义链与编码SEQ ID NO：2和/或SEQ IDNO：3的mRNA互补。

14.抗南方根结线虫的转基因植物，其特征在于其是烟草植物并且表达dsRNA，在所述dsRNA中反义链与编码SEQ ID NO：11的mRNA互补。

15.用于预防性处理植物以使其对一种或多种植物病原体昆虫、线虫、真菌的攻击具有抗性的方法，其包括权利要求1至10中任一项定义的步骤a)-e)。

16.权利要求15的方法，其还包括用肥料、生物刺激剂、杀真菌剂、合成的或天然的杀线虫剂、除草剂或杀虫剂处理所获得的植物的步骤。