[发明专利]功能性丝状真菌检测方法、含有功能性丝状真菌制品的评价方法和引物对

说明书

技术领域

本发明涉及功能性丝状真菌检测方法、含有功能性丝状真菌制品的评价方法和引物对。

背景技术

已知丝状真菌，即霉，具有各种功能，还已知例如病原性丝状真菌引起植物病害。病原性丝状真菌是使圆白菜、黄瓜、西红柿、茄子、油菜等许多蔬菜、稻等农产品，以及花、树木、草坪等中发生枯萎病、根腐病、叶腐病、枯萎病等病害的原因。作为这些丝状真菌，熟知的有丝核菌属、镰刀菌属、腐霉属、木霉属、核盘菌属等。

作为针对这种病原性丝状真菌的有效的植物病害防除方法，可以列举使用微生物、尤其是丝状真菌的植物病害防除剂(例如，国际公开第97/31521号小册子和国际公开第2006/085567号小册子)。人们已经了解，一般来说，细菌类与丝状真菌类中，增殖和活性所适宜的生长条件不同。因此，人们希望使用在适于病原性丝状真菌的生长的条件下可以发挥植物病害防除功能的功能性丝状真菌来代替细菌的植物病害防除剂比使用细菌类的植物病害防除剂有更大的效果。其中，使用属于墨汁鬼伞科的丝状真菌的植物病害防除剂，其功能高(参照国际公开第2006/085567号小册子)。

可是，为了使用这种功能性丝状真菌作为植物病害防除剂，需要使之以适度的密度存在于土壤或堆肥中，使之发挥适当的植物病害防除功能，并使这种功能得以维持。

为了简便地利用功能性丝状真菌的规定功能，有时也在土壤或堆肥、固体培养基或固定化载体中接种功能性丝状真菌，制造含有功能性丝状真菌制品。在制造这种含有功能性丝状真菌制品时，在制造、保管或搬运等过程中，必须适当监控功能性丝状真菌浓度。

近年来，开发了使用分子生物学的手法进行菌的鉴定、检测的技术。例如，在特开2007-268471号公报中，通过提供一种检测存在于有机性废弃物或废水等沼气发酵处理污泥中的与沼气生成相关的沼气生成细菌和酸生成细菌，评价其活性的方法，公开了沼气发酵装置的适当运转管理指标和运行控制方法。该方法利用了综合性地定量检测属于酸生成细菌的真正细菌群或具有沼气生成能力的沼气生成菌群的方法，其包括使用PCR法定量检测DNA和RNA浓度，经时监控的步骤。

此外，特开2007-174973号公报公开了能够高精确度、迅速、简便且便宜地对农产物(谷类、蔬菜)、畜产品(肉类)、水产品(鱼类和贝类)、毛发、体液、微生物等试样中所含的DNA进行DNA扩增和分析的技术。该方法包括通过PCR反应扩增试样中的DNA的工序，该PCR扩增工序使用SSR引物对，通过多重PCR进行。

然而，在土壤和堆肥中，除了作为目的物的功能性的丝状真菌以外，还存在各种丝状真菌和细菌类。为了从这种土壤或堆肥等中，只监控特定的功能性丝状真菌，就需要呈现出特异性极高的检测方法。而且，需要适当进行接种功能性丝状真菌而获得的含有功能性丝状真菌制品的评价的评价方法。

发明内容

本发明的目的是提供能够以高精确度检测功能性丝状真菌短矮鬼伞(Coprinellus curtus)的功能性丝状真菌检测方法和含有功能性丝状真菌制品的评价方法。

本发明的第一个方式是提供功能性丝状真菌检测方法，其使用选自(1)具有序列号1所示的碱基序列的多核苷酸和具有与其互补的碱基序列的多核苷酸和具有与它们实质相同的碱基序列的多核苷酸，(2)具有序列号2所示的碱基序列的多核苷酸和具有与其互补的碱基序列的多核苷酸和具有与它们实质相同的碱基序列的多核苷酸，(3)具有序列号3所示的碱基序列的多核苷酸和具有与其互补的碱基序列的多核苷酸和具有与它们实质相同的碱基序列的多核苷酸，和(4)具有序列号4所示的碱基序列的多核苷酸和具有与其互补的碱基序列的多核苷酸和具有与它们实质相同的碱基序列的多核苷酸中的至少1个多核苷酸，检测试样中的功能性丝状真菌短矮鬼伞。

本发明的第二个方式是含有功能性丝状真菌制品的评价方法，该方法是含有功能性丝状真菌短矮鬼伞的含有功能性丝状真菌制品的评价方法，其包括对来源于前述含有功能性丝状真菌制品的试样，使用由序列号1或序列号3所示的碱基序列或与其实质相同的碱基序列构成的多核苷酸，和由序列号2或序列号4所示的碱基序列或与其实质相同的碱基序列构成的多核苷酸所构成的引物对，进行定量PCR，基于前述定量的PCR的结果，评价前述含有功能性丝状真菌制品中的功能性丝状真菌短矮鬼伞的存在或浓度。

本发明的第三个方式是提供由下述多核苷酸构成的引物对：(1)具有序列号1或序列号3所示的碱基序列或与它们实质相同的可以识别功能性丝状真菌短矮鬼伞的碱基序列的多核苷酸、(2)具有序列号2或序列号4所示的碱基序列或与它们实质相同的可以识别功能性丝状真菌短矮鬼伞的碱基序列的多核苷酸。