[发明专利]白蚁纤维素酶在酵母中的异源表达

权利要求书

1.包含编码纤维素酶的至少50个连续氨基酸的核酸片段的分离的多核苷酸，其中所述核酸片段是密码子优化的以在酵母菌株中表达，并且其中所述纤维素酶是白蚁纤维素酶或白蚁相关的共生体纤维素酶。

2.权利要求1的多核苷酸，其中所述核酸片段的密码子适应指数(CAI)是大约0.6至1.0。

3.权利要求2的多核苷酸，其中所述核酸片段的密码子适应指数(CAI)是大约0.7至大约0.9。

4.权利要求1-3任一项的多核苷酸，其中所述酵母选自：酿酒酵母、乳酸克鲁维酵母、马克斯克鲁维酵母、粟酒裂殖酵母、白假丝酵母、巴斯德毕赤酵母、树干毕赤酵母、解脂耶氏酵母、多形汉逊酵母、红发夫酵母、产朊假丝酵母、Arxula adeninivorans、汉逊德巴利酵母、多形德巴利酵母、粟酒裂殖酵母和西方许旺酵母。

5.权利要求4的多核苷酸，其中所述酵母是酿酒酵母。

6.权利要求1-5任一项的多核苷酸，其中所述纤维素酶具有外切葡聚糖酶活性。

7.权利要求1-6任一项的多核苷酸，其中所述纤维素酶具有内切葡聚糖酶活性。

8.权利要求1-7任一项的多核苷酸，其中所述纤维素酶具有外切葡聚糖酶和内切葡聚糖酶两种活性。

9.权利要求1-5任一项的多核苷酸，其中所述纤维素酶具有β-葡萄糖苷酶活性。

10.权利要求1-9任一项的多核苷酸，其中所述纤维素酶是原生动物纤维素酶。

11.权利要求10的多核苷酸，其中所述纤维素酶是Holomastigotoides mirabile、黄胸散白蚁共生体、澳洲乳白蚁共生体、黄胸散白蚁共生体、点刻隐尾蠊共生体、达尔文澳白蚁共生体、Pseudotrichonympha grassii、北美散白蚁肠道共生体、高山原白蚁共生体或恒春新白蚁共生体纤维素酶。

12.权利要求1-9任一项的多核苷酸，其中所述纤维素酶是后生动物纤维素酶。

13.权利要求12的多核苷酸，其中所述纤维素酶是台湾乳白蚁、高山象白蚁、澳大利亚矛颚家白蚁、达尔文澳白蚁、黄胸散白蚁、北美散白蚁、Nasutitermes walkeri或食木蟑螂纤维素酶。

14.权利要求1-9任一项的多核苷酸，其中所述纤维素酶是细菌纤维素酶。

15.权利要求1-9任一项的多核苷酸，其中所述纤维素酶是真菌纤维素酶。

16.权利要求1-9任一项的多核苷酸，其中所述纤维素酶是酵母纤维素酶，并且其中所述核酸片段是密码子优化的以在异源酵母菌株中表达。

17.权利要求1-16任一项的多核苷酸，其中所述核酸片段编码白蚁纤维素酶或白蚁相关的共生体纤维素酶的至少100个连续氨基酸。

18.权利要求17的多核苷酸，其中所述核酸片段编码白蚁纤维素酶或白蚁相关的共生体纤维素酶的至少200个连续氨基酸。

19.权利要求18的多核苷酸，其中所述核酸片段编码白蚁纤维素酶或白蚁相关的共生体纤维素酶的至少300个氨基酸。

20.权利要求19的多核苷酸，其中所述核酸片段编码白蚁纤维素酶或白蚁相关的共生体纤维素酶的至少350个氨基酸。

21.权利要求1-20任一项的多核苷酸，其中4、5、6、7、8、9或10个连续A、T、C、或G核苷酸的序列内的至少一个核苷酸被替换为不同的核苷酸，其中所述核苷酸替换不改变多核苷酸所编码的氨基酸序列，并且其中所述核苷酸替换产生编码酿酒酵母中的氨基酸的第二最常使用的密码子。

22.权利要求1-21任一项的多核苷酸，其中通过将限制性酶位点内的至少一个核苷酸替换为不同的核苷酸而除去所述多核苷酸内的至少一个限制性酶位点，其中所述核苷酸替换不改变多核苷酸所编码的氨基酸序列，并且其中所述核苷酸替换产生编码酿酒酵母中的氨基酸的第二最常使用的密码子。

23.权利要求22的多核苷酸，其中一个或多个限制性酶位点选自PacI、AscI、BamHI、BglII、EcoRI和XhoI。