[发明专利]形成鉴别标记物的方法

权利要求书

1.在生物体中形成鉴别标记物的方法，包括步骤：

-选择目标性状；

-确定与该性状相关的基因座；

-确定基因座的遗传图位；

-鉴别位于基因座遗传距离内的标记物；

-提供生物体种群，其中种群的每个成员均含有该标记物；

-确定种群每个成员的标记物的核苷酸序列；

-比对标记物的核苷酸序列；

-选择标记物序列中的至少一个位置，其在种群的所有标记物中含有相同的核苷酸；

-设计可以与至少一个位置的两侧邻近的标记物序列杂交的寡核苷酸，并且其中该寡核苷酸在该至少一个位置上还包含一个与标记物中至少一个位置上的核苷酸不同的核苷酸(标记物核苷酸)；

-使用寡核苷酸的定向核苷酸交换将标记物核苷酸引入生物体的DNA中，从而将独特的且选择性的SNP引入与性状相关的标记物中。

2.根据权利要求1的方法，其中使用分子标记物技术鉴别标记物。

3.根据权利要求1或2的方法，其中标记物位于距性状最多1cM的距离，优选地最多0.1cM的距离。

4.根据权利要求1-3的方法，其中形成了两种或多种标记物，所述标记物独立地位于距性状最多2cM的距离，优选地最多0.2cM的距离。

5.根据权利要求1-4的方法，其中生物体是植物、动物或微生物。

6.根据权利要求1-5的方法，其中生物体是低多态性生物体，例如棉花(Gossipyum hirsutum)、大豆(Glycine max)、栽培番茄(Solanum esculentum)、西瓜(Citrullus lanatus)和黄瓜(Cucumis sativa)。

7.根据权利要1-5的方法，其中分子标记物技术选自多重标记物技术，优选地选自AFLP、RAPD、SSR、SFP和/或SNPs。

8.根据权利要求4的方法，其中至少两种分子标记物利用选自AFLP、RAPD、SSR、SFP和/或SNPs的多重标记物技术独立地获得。

9.根据权利要求1-8的方法，其中生物体的DNA来自适于育种的供体种系。

10.根据前述任一权利要求的方法，其用于将独特的且选择性的标记物引入多拷贝的DNA片段。

11.在现存育种材料中产生一个或多个人工标记物的方法的用途。

12.将一个或多个标记物引入遗传修饰的材料的方法的用途。

13.用于在育种原料中产生独特分子标记物的TNE的用途。